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Immunologie et infection

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使用基于路西法抹去的生长测定，确定化学抑制剂对细胞内弓形体贡迪生长的抑制效率

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Journal JoVE Immunologie et infection

Determination of Chemical Inhibitor Efficiency against Intracellular Toxoplasma Gondii Growth Using a Luciferase-Based Growth Assay

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使用基于路西法抹去的生长测定，确定化学抑制剂对细胞内弓形体贡迪生长的抑制效率

DOI:

10.3791/60985-v

•

09:49 min

•

April 29, 2020

•

Melanie Key*^1,2, Amy Bergmann*^1,2, Chiara Micchelli², L. Brock Thornton², Sophie Millard², Zhicheng Dou²

¹Department of Biological Sciences,Clemson University, ²Eukaryotic Pathogens Innovation Center,Clemson University

Chapitres

00:04Introduction
00:49Luciferase-Based ToxoplasmaGrowth Assay
02:25Chemical Compound Inhibition Efficacy Evaluation
04:08CRISPR-Cas9-Based Gene Deletion
05:59Toxoplasma Transfection
06:51Knockout Parasite Cloning
08:06Results: Representative LHVS Inhibition Efficacy Against Intracellular Toxoplasma Growth
09:22Conclusion

Summary

Traduction automatique

本文介绍的是一种协议，用于使用基于荧光酶的生长测定来评估化合物对弓形体淋酸体内生长的抑制作用。该技术用于通过基因删除相应的靶基因来确认抑制特异性。以LHVS对TgCPL蛋白酶的抑制为例。

Tags

Keywords: Toxoplasma Gondii Luciferase-based Growth Assay Chemical Inhibitor Drug Target CRISPR-Cas9 Intracellular Pathogen High-throughput Screening Parasite Doubling Time Human Foreskin Fibroblasts Luciferase Substrate Microplate Reader Normalized Fold-change Linear Regression

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