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An In Vitro Single-Molecule Imaging Assay for the Analysis of Cap-Dependent Translation Kinetics
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Un saggio di imaging a singola molecola in vitro per l'analisi della cinetica di traduzione dipendente dal cappuccio

DOI:
10.3791/61648-v

•

09:52 min

•

September 15, 2020

•

, ,
1Molecular Biology Program,Memorial Sloan Kettering Cancer Center

Chapitres

  • 00:05Introduction
  • 00:51Equipment Preparation
  • 03:113’-End Biotinylated mRNA Immobilization
  • 05:20Translation Mix Assembly and Delivery
  • 07:24Results: Analyses for Saccharomyces cerevisiae Translation of a Firefly Luciferase-encoding mRNA
  • 09:12Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Il monitoraggio dei singoli eventi di traduzione consente studi cinetici ad alta risoluzione sui meccanismi di traduzione dipendenti dal cappuccio. Qui dimostriamo un saggio a singola molecola in vitro basato sulle interazioni di imaging tra anticorpi etichettati fluorescentmente e peptidi nascenti etichettati epitopi. Questo metodo consente la caratterizzazione a singola molecola della cinetica di iniziazione e allungamento peptidico durante la traduzione attiva in vitro dipendente dal cappuccio.

Tags

Single-molecule ImagingCap-dependent TranslationIn Vitro TranslationCell-free TranslationMicroscope SetupLaser ControlCamera SettingsSyringe PumpWash Protocol

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