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Un ensayo de imágenes de molécula única in vitro para el análisis de cinética de traducción dependiente de la tapa
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An In Vitro Single-Molecule Imaging Assay for the Analysis of Cap-Dependent Translation Kinetics
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Un ensayo de imágenes de molécula única in vitro para el análisis de cinética de traducción dependiente de la tapa

DOI:
10.3791/61648-v

•

09:52 min

•

September 15, 2020

•

, ,
1Molecular Biology Program,Memorial Sloan Kettering Cancer Center

Chapitres

  • 00:05Introduction
  • 00:51Equipment Preparation
  • 03:113’-End Biotinylated mRNA Immobilization
  • 05:20Translation Mix Assembly and Delivery
  • 07:24Results: Analyses for Saccharomyces cerevisiae Translation of a Firefly Luciferase-encoding mRNA
  • 09:12Conclusion

Summary

Traduction automatique

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El seguimiento de eventos de traducción individuales permite estudios cinéticos de alta resolución de mecanismos de traducción dependientes de la tapa. Aquí demostramos un ensayo in vitro de una sola molécula basado en interacciones por imágenes entre anticuerpos etiquetados fluorescentemente y péptidos nacientes etiquetados con epitopos. Este método permite la caracterización de moléculas únicas de cinética de iniciación y elongación peptídica durante la traducción activa dependiente de la tapa in vitro.

Tags

Single-molecule ImagingCap-dependent TranslationIn Vitro TranslationCell-free TranslationMicroscope SetupLaser ControlCamera SettingsSyringe PumpWash Protocol

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