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Assessing Protein Interactions in Live-Cells with FRET-Sensitized Emission

Avaliando interações proteicas em células vivas com emissão sensibilizada por FRET

DOI:
10.3791/62241-v

•

09:15 min

•

April 22, 2021

•

, , , , ,
1Department of Biophysics and Cell Biology, Faculty of Medicine,University of Debrecen, 2Gynecologic Oncology Division,Stanford University School of Medicine

Chapitres

  • 00:05Introduction
  • 01:12Plasmid Construction
  • 01:52Cell Culture and Transfection
  • 02:41FRET Imaging
  • 05:42Image Analysis for Detecting Absolute FRET Efficiencies Using Donor Quenching and Sensitized Emission
  • 07:01Results: Quantification of FRET Images
  • 08:28Conclusion

Summary

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A Transferência de Energia de Ressonância de Förster (FRET) entre duas moléculas de fluoróforo pode ser usada para estudar as interações proteicas na célula viva. Aqui, um protocolo é fornecido sobre como medir o FRET em células vivas, detectando a emissão sensibilizada do aceptor e a têmpera da molécula doadora usando microscopia confocal de varredura a laser.

Tags

Keywords: FRETFRET-sensitized EmissionProtein InteractionsLive-cell ImagingDonor QuenchingAcceptor Sensitized EmissionCrosstalkFluorescent ProteinsDetection EfficiencyDonor-acceptor Fusion ProteinEGFP-mCherryCell TransfectionConfocal MicroscopyEnvironmental Chamber

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