/
/
MACROPHAGE ve T Hücre Hatlarında CRISPR/Cas9 ve Hücre Sıralama tarafından Gen Knock-in
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:05Introduction
- 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
- 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
- 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
- 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
- 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
- 10:16Representative Results
- 10:52Conclusion
Bu protokol, makrofaj ve T hücre satırlarındaki darbe denemelerini basitleştirmek için floresan muhabirleri ve hücre sıralamasını kullanır. Bu basitleştirilmiş knock-in deneyleri için iki plazmid kullanılır, yani CRISPR / Cas9- ve DsRed2 ifade eden plazmid ve bağışıklık hücrelerindeki Rosa26 lokusunda kalıcı olarak entegre edilen EBFP2'yi ifade eden homolog bir rekombinasyon donör plazmid.
