/
/
Raske, enzymatiske metoder for forsterkning av minimale, lineære maler for proteinprototyping ved hjelp av cellefrie systemer
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:05Introduction
- 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
- 02:21Digestion and Circularization
- 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
- 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
- 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
- 06:49Conclusion
Studien beskriver en protokoll for å lage store (μg-mg) mengder DNA for proteinscreeningskampanjer fra syntetiske genfragmenter uten kloning eller bruk av levende celler. Den minimale malen er enzymatisk fordøyd og sirkulærisert og deretter forsterket ved hjelp av isotermisk rullesirkelforsterkning. Cellefrie uttrykksreaksjoner kan utføres med det ubetenkne produktet.
