Journal
/
/
التعديل الكيميائي لبقايا التربتوفان في Ca2+-ATPase N-domain لدراسة تريبتوفان-ANS FRET
Journal JoVE
Biochimie
Author Produced
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu.  Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Journal JoVE Biochimie
Chemical Modification of the Tryptophan Residue in a Recombinant Ca2+-ATPase N-domain for Studying Tryptophan-ANS FRET
DOI:

12:07 min

October 09, 2021

,

Chapitres

  • 00:03Introduction
  • 01:15Determination (in silico) of the ANS and SERCA N‐Domain Interaction
  • 03:09Expression and Purification of the Recombinant N‐Domain
  • 03:39Monitor the Formation of the ANS‐N‐Domain Complex Based on ANS and N‐Domain Fluorescence Intensity Changes
  • 07:38N‐Domain Intrinsic Fluorescence Titration by Trp Chemical Modification with NBS
  • 08:43Titrate the NBS Modified N‐Domain with ANS by Recording Fluorescence Spectra at 25°C
  • 09:37Evidence of ANS Binding to the Chemically Modified N‐Domain by Excitation at λ = 370 nm
  • 10:32Results Overview
  • 11:30Conclusions

Summary

Traduction automatique

ANS يربط Ca2 +-ATPase recombinant N-المجال. عرض أطياف مضان نمط مثل FRET عند الإثارة في الطول الموجي من 295 نانومتر. ويروي التعديل الكيميائي الذي يتوسط فيه المكتب الوطني للإحصاء في Trp مضان المجال N، مما يؤدي إلى عدم وجود نقل للطاقة (FRET) بين بقايا Trp و ANS.

Vidéos Connexes

Read Article