Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:05Introduction
- 00:44Generation of Baculovirus-infected TIPS Cells
- 03:05Production of AAV Vector
- 05:08Lysis of Cells and Release of AAV
- 06:07Purification of AAV Vector Using Affinity Column Chromatography System
- 08:03Concentration and Diafiltration of AAV Vector Using Tangential Flow Filtration (TFF)
- 08:54Results: Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector Using Baculovirus-Insect Cell Culture System
- 09:48Conclusion
Bu protokolde AAV2 vektörü, süspansiyon kültüründe baculovirüs (BV)-AAV2-yeşil floresan protein (GFP) veya terapötik gen ve BV-AAV2-rep-cap enfekte Sf9 hücreleri ile Spodoptera frugiperda (Sf9) böcek hücrelerinin birlikte kült haline sokulmasıyla üretilmektedir. AAV parçacıkları deterjan kullanılarak hücrelerden salınır, netleştirilir, benzeşim kolonu kromatografisi ile saflaştırılır ve teğetsel akış filtrasyonu ile konsantre edilir.
