Journal
/
/
فحص خلوي قائم على المراسل لمراقبة كفاءة الربط
Journal JoVE
Biochimie
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu.  Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Journal JoVE Biochimie
A Reporter Based Cellular Assay for Monitoring Splicing Efficiency
DOI:

08:53 min

September 15, 2021

, ,

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
  • 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
  • 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
  • 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
  • 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
  • 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
  • 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
  • 08:09Conclusion

Summary

Traduction automatique

يصف هذا البروتوكول فحصا لمراسل minigene لمراقبة تأثير طفرات موقع 5'-splice على الربط ويطور مثبط U1 snRNA لإنقاذ تثبيط الربط الناجم عن الطفرة. يتم التعبير عن بنى المراسل والمثبط U1 snRNA في خلايا HeLa ، ويتم تحليل الربط عن طريق تمديد التمهيدي أو RT-PCR.

Vidéos Connexes

Read Article