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Chapitres
- 00:04Introduction
- 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
- 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
- 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
- 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
- 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
- 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
- 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
- 08:09Conclusion
Ce protocole décrit un test rapporteur minigène pour surveiller l’impact des mutations du site de l’épissure 5'sur l’épissage et développe un suppresseur U1 snRNA pour le sauvetage de l’inhibition de l’épissage induite par mutation. Les constructions de l’ARNN U1 rapporteur et suppresseur sont exprimées dans les cellules HeLa, et l’épissage est analysé par extension d’amorce ou RT-PCR.
