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Chapitres
- 00:04Introduction
- 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
- 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
- 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
- 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
- 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
- 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
- 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
- 08:09Conclusion
इस प्रोटोकॉल का वर्णन करता है एक minigene रिपोर्टर परख splicing पर 5'-splice साइट उत्परिवर्तन के प्रभाव की निगरानी करने के लिए और उत्परिवर्तन प्रेरित splicing निषेध के बचाव के लिए suppressor U1 snRNA विकसित करता है. रिपोर्टर और दमनकारी U1 snRNA निर्माणों को हेला कोशिकाओं में व्यक्त किया जाता है, और प्राइमर एक्सटेंशन या आरटी-पीसीआर द्वारा स्प्लिसिंग का विश्लेषण किया जाता है।
