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Chapitres
- 00:04Introduction
- 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
- 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
- 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
- 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
- 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
- 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
- 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
- 08:09Conclusion
Este protocolo descreve um ensaio de repórter minigene para monitorar o impacto de mutações de 5'-splices no splicing e desenvolve snRNA supressor U1 para o resgate da inibição de emenda induzida por mutação. As construções de snRNA do repórter e supressor U1 são expressas em células HeLa, e o splicing é analisado por extensão de primer ou RT-PCR.
