Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:04Introduction
- 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
- 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
- 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
- 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
- 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
- 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
- 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
- 08:09Conclusion
Этот протокол описывает минигенный репортерный анализ для мониторинга влияния мутаций 5-образного сайта сращивания на сплайсинг и разрабатывает супрессор U1 snRNA для спасения ингибирования сплайсинга, вызванного мутациями. Конструкции репортера и супрессора U1 snRNA экспрессируются в клетках HeLa, а сплайсинг анализируется путем праймерного расширения или ОТ-ПЦР.
