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Saggio di glicosilasi uracil-DNA mediante desorbimento laser assistito da matrice/analisi spettrometria di massa a tempo di volo
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Uracil-DNA Glycosylase Assay by Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis
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Saggio di glicosilasi uracil-DNA mediante desorbimento laser assistito da matrice/analisi spettrometria di massa a tempo di volo

DOI:
10.3791/63089-v

•

12:19 min

•

April 22, 2022

•

, , , , , , ,
1Department of Clinical Laboratory Sciences and Medical Biotechnology, College of Medicine,National Taiwan University, 2Department of Laboratory Medicine,National Taiwan University Hospital, 3Center for Microbial Pathogenesis, Nationwide Children’s Hospital and the Department of Pediatrics,The Ohio State University

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 01:28DNA Glycosylase Assay
  • 04:43Transferring UDG Reaction Products to a Matrix Chip
  • 05:33Setting up the Assay Parameters on the Mass Spectrometer
  • 07:19Mass Spectrometer Operation, Viewing Mass Spectra, and Analyzing the Data
  • 09:03Results: UDG Assay Using MALDI-TOF MS for AP Site Containing Product Analysis
  • 11:01Conclusion

Summary

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Un metodo non marcato, non radio-isotopico per analizzare l'attività della glicosilasi uracil-DNA, è stato sviluppato utilizzando la spettrometria di massa MALDI-TOF per l'analisi diretta del prodotto contenente sito apurinico/aprimidinico. Il test si è rivelato abbastanza semplice, specifico, rapido e facile da usare per la misurazione della glicosilasi del DNA.

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Keywords: Uracil-DNA GlycosylaseMALDI-TOF Mass SpectrometryDNA RepairAP ProductLabel-freeEnzyme Activity AssayGuanine-uracil BaseReaction BufferSubstrate PreparationReaction Termination

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