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Journal JoVE Immunologie et infection
Generation of Null Mutants to Elucidate the Role of Bacterial Glycosyltransferases in Bacterial Motility
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Generazione di mutanti nulli per chiarire il ruolo delle glicosiltransferasi batteriche nella motilità batterica

DOI:
10.3791/63231-v

•

12:29 min

•

March 11, 2022

•

, , ,
1Departamento de Genética, Microbiología y Estadística,Universidad de Barcelona, 2Human Health Therapeutics Research Centre,National Research Council Canada, 3Department of Chemistry,Carleton University, 4Department of Biology,Carleton University

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 01:01Construction of pDM4 Recombinant Plasmid with PCR In-Frame Deletion Products
  • 03:10Preparation of Electrocompetent E. coli and Electroporation of pDM4 Recombinant Plasmid
  • 04:52Transfer of In-Frame Deletion to the Aeromonas Strain
  • 07:44Motility Assays in Liquid and Semi-Solid Media
  • 08:34Isolation and Purification of Flagella
  • 10:23Results: Confirmation of Null Mutants and Phenotypic Analysis of Polar Flagella
  • 11:47Conclusion

Summary

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Qui, descriviamo la costruzione di mutanti nulli di Aeromonas in specifiche glicosiltransferasi o regioni contenenti glicosiltransferasi, i saggi di motilità e la purificazione dei flagelli eseguiti per stabilire il coinvolgimento e la funzione dei loro enzimi codificati nella biosintesi di un glicano, nonché il ruolo di questo glicano nella patogenesi batterica.

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Null MutantsBacterial GlycosyltransferasesBacterial MotilityFlagella GlycosylationIn-frame DeletionPCRCloningPDM4 VectorE. Coli Transformation

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