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Tracciamento delle particelle sensibili alla massa per caratterizzare la dinamica delle macromolecole associate alla membrana
Journal JoVE
Biochimie
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Journal JoVE Biochimie
Mass-Sensitive Particle Tracking to Characterize Membrane-Associated Macromolecule Dynamics
DOI:

13:30 min

February 18, 2022

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Chapitres

  • 00:05Introduction
  • 00:43Cleaning of Microscope Slides
  • 01:48Assembly of Flow Chambers
  • 02:41Supported Lipid Bilayer (SLB) Formation
  • 03:31Imaging
  • 04:31Data Analysis
  • 10:25Results: Native and Ratiometric View of Exemplary Surfaces
  • 11:01Results: Calibration of the Mass-to-Contrast Relation for MSPT Measurements
  • 12:15Results: Deciphering Oligomer States of Membrane-Associated Proteins
  • 12:57Conclusion

Summary

Traduction automatique

Questo protocollo descrive un approccio basato sull'elaborazione delle immagini e sul tracciamento di singole particelle basato su iSCAT che consente l'indagine simultanea della massa molecolare e del comportamento diffusivo delle macromolecole che interagiscono con le membrane lipidiche. Le istruzioni dettagliate per la preparazione del campione, la conversione da massa a contrasto, l'acquisizione di filmati e la post-elaborazione sono fornite insieme alle indicazioni per prevenire potenziali insidie.

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