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反向遗传学设计正义RNA病毒变异株
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Génétique
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Journal JoVE
Génétique
Reverse Genetics to Engineer Positive-Sense RNA Virus Variants
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反向遗传学设计正义RNA病毒变异株
DOI:
10.3791/63685-v
•
15:49 min
•
June 09, 2022
•
Shalini Soni
,
Shubhra Agarwal
,
Rakesh Aggarwal
,
Naga Suresh Veerapu
1
Virology Section, Department of Life Sciences
,
Shiv Nadar University
,
2
Gastroenterology
,
Sanjay Gandhi Postgraduate Institute of Medical Sciences
Chapitres
00:04
Introduction
01:01
Genome‐Wide Substitution Mutagenesis of JFH1 Using Error‐Prone PCR
02:46
Estimation of the Proportion of Mutations in ep‐PCR Products (Mutant Libraries)
06:08
Viral RNA Transfection of the Huh7.5 Cell Line
07:57
Quantification of Virus Titers
11:59
Drug‐Resistant Viral Variant Selection
13:33
Results: Integration of ep‐PCR and Virus Reverse Genetics to Generate HCV Mutants
15:17
Conclusion
Summary
Traduction automatique
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Traduction automatique
该协议描述了一种通过使用易出错的PCR和反向遗传学结合全长突变RNA合成在丙型肝炎病毒基因组中引入可控遗传多样性的方法。该方法为表型选择提供了一个模型,可用于10 kb长的正义RNA病毒基因组。
Tags
Keywords: Reverse Genetics
Positive-sense RNA Virus
Viral Genome
Mutagenesis
RNA Library
Phenotype Selection
Cloning-free
Ep-PCR
In Vitro RNA Synthesis
CDNA Synthesis
Amplification
A Overhang Addition
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