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대사 표지 및 질량 분광법으로 노화 및 비분할 배양된 세포에서의 단백질 회전율 측정

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Biochimie

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Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells with Metabolic Labeling and Mass Spectrometry

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대사 표지 및 질량 분광법으로 노화 및 비분할 배양된 세포에서의 단백질 회전율 측정

DOI:

10.3791/63835-v

•

08:52 min

•

April 06, 2022

•

Matthew Payea, Myriam Gorospe, Nathan Basisty

¹Laboratory of Genetics and Genomics, National Institute on Aging Intramural Research Program,National Institutes of Health, ²Translational Gerontology Branch, National Institute on Aging Intramural Research Program,National Institutes of Health

Chapitres

00:05Introduction
00:58Labeling of Cells Pulsed SILAC and Harvest of Lysates
02:29In-Solution Trypsin Digestion and Sample Clean-Up with Solid-Phase Extraction (SPE)
04:15Data-Dependent Acquisition Mass Spectrometry Analysis and Calculation of Protein Half-Lives
06:31Results: Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells Using pSILAC Mass Spectrometry
08:13Conclusion

Summary

Traduction automatique

이 프로토콜은 펄스 SILAC를 사용한 노화 및 비분열 세포의 대사 표지, 비표적 질량 분석법 분석 및 단백질 반감기의 간소화된 계산을 위한 워크플로우를 설명합니다.

Tags

Keywords: Protein Turnover Senescent Cells Non-dividing Cells Metabolic Labeling Mass Spectrometry SILAC Protein Homeostasis Cellular Stress Aging Neurodegenerative Disease LC-MS Trypsin Urea Ammonium Bicarbonate Dithiothreitol Iodoacetamide

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