Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:04Introduction
- 01:04Slide and Coverslip Cleaning
- 03:04mGluR2 Expression with Incorporated Unnatural Amino Acid, Fluorescent Labeling, and Extraction
- 05:13Single-Molecule Flow Chamber Assembly and Functionalization
- 06:23Microscope Setup and smFRET Data Acquisition
- 07:47Data Analysis
- 08:39Results: Analyzing Conformational Dynamics of Membrane Receptors Proteins
- 10:11Conclusion
Denne undersøgelse præsenterer en detaljeret procedure til udførelse af enkeltmolekyle fluorescensresonansenergioverførsel (smFRET) eksperimenter på G-proteinkoblede receptorer (GPCR'er) ved hjælp af stedsspecifik mærkning via unaturlig aminosyre (UAA) inkorporering. Protokollen giver en trinvis vejledning til smFRET-prøveforberedelse, eksperimenter og dataanalyse.
