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1分子FRETを用いた膜受容体の立体構造ダイナミクスの可視化
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Visualizing the Conformational Dynamics of Membrane Receptors Using Single-Molecule FRET
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1分子FRETを用いた膜受容体の立体構造ダイナミクスの可視化

DOI:
10.3791/64254-v

•

10:59 min

•

August 17, 2022

•

, ,
1Department of Molecular Biosciences,Northwestern University

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 01:04Slide and Coverslip Cleaning
  • 03:04mGluR2 Expression with Incorporated Unnatural Amino Acid, Fluorescent Labeling, and Extraction
  • 05:13Single-Molecule Flow Chamber Assembly and Functionalization
  • 06:23Microscope Setup and smFRET Data Acquisition
  • 07:47Data Analysis
  • 08:39Results: Analyzing Conformational Dynamics of Membrane Receptors Proteins
  • 10:11Conclusion

Summary

Traduction automatique

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この研究では、Gタンパク質共役型受容体(GPCR)の単一分子蛍光共鳴エネルギー移動(smFRET)実験を実行するための詳細な手順を示します 非天然アミノ酸(UAA)の取り込み による 部位特異的標識を使用します。このプロトコルは、smFRETサンプル調製、実験、およびデータ分析のためのステップバイステップガイドを提供します。

Tags

Single-molecule FRETMembrane ReceptorsConformational DynamicsProtein LabelingMGluR2HEK 293T CellsPEGylationAmino SalinizationDremelAcetonePotassium HydroxideMethanolPoly-L/D-lysineTransfectionAlkyne Cyanine Dyes

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