Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:04Introduction
- 01:04Slide and Coverslip Cleaning
- 03:04mGluR2 Expression with Incorporated Unnatural Amino Acid, Fluorescent Labeling, and Extraction
- 05:13Single-Molecule Flow Chamber Assembly and Functionalization
- 06:23Microscope Setup and smFRET Data Acquisition
- 07:47Data Analysis
- 08:39Results: Analyzing Conformational Dynamics of Membrane Receptors Proteins
- 10:11Conclusion
В этом исследовании представлена подробная процедура проведения экспериментов по переносу энергии одномолекулярного флуоресцентного резонанса (smFRET) на рецепторах, связанных с G-белком (GPCR), с использованием сайт-специфической маркировки через включение неестественных аминокислот (UAA). Протокол содержит пошаговое руководство по подготовке образцов smFRET, экспериментам и анализу данных.
