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Visualizing the Conformational Dynamics of Membrane Receptors Using Single-Molecule FRET
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Visualización de la dinámica conformacional de los receptores de membrana utilizando FRET de molécula única

DOI:
10.3791/64254-v

•

10:59 min

•

August 17, 2022

•

, ,
1Department of Molecular Biosciences,Northwestern University

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 01:04Slide and Coverslip Cleaning
  • 03:04mGluR2 Expression with Incorporated Unnatural Amino Acid, Fluorescent Labeling, and Extraction
  • 05:13Single-Molecule Flow Chamber Assembly and Functionalization
  • 06:23Microscope Setup and smFRET Data Acquisition
  • 07:47Data Analysis
  • 08:39Results: Analyzing Conformational Dynamics of Membrane Receptors Proteins
  • 10:11Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Este estudio presenta un procedimiento detallado para realizar experimentos de transferencia de energía de resonancia de fluorescencia de molécula única (smFRET) en receptores acoplados a proteínas G (GPCR) utilizando el etiquetado específico del sitio a través de la incorporación de aminoácidos no naturales (UAA). El protocolo proporciona una guía paso a paso para la preparación de muestras smFRET, experimentos y análisis de datos.

Tags

Keywords: Single-molecule FRETMembrane ReceptorsConformational DynamicsProtein LabelingMGluR2HEK 293T CellsPEGylationAmino SalinizationDremelAcetonePotassium HydroxideMethanolPoly-L/D-lysineTransfectionAlkyne Cyanine Dyes

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