Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:05Introduction
- 00:42Saccharomyces cerevisiae Cell Culture
- 02:00EdU Labeling
- 02:40Cell Fixation and Permeabilization
- 03:20Click-It Reaction for Cytometry Analysis
- 06:32Results: Using EdU Labeling to Determine the S-Phase Duration in Saccharomyces cerevisiae
- 07:56Conclusion
Vi beskriver två komplementära protokoll för att exakt bestämma S-fasvaraktighet i S. cerevisiae med hjälp av EdU, en tymidinanalog, som införlivas in vivo och detekteras med hjälp av Click-kemi genom mikroskopi och flödescytometri. Det möjliggör enkel karakterisering av varaktigheten av DNA-replikation och förbisedda replikationsdefekter hos mutanter.
