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Imagem de molécula única da mobilidade lateral e atividade do canal iônico em bicamadas lipídicas usando microscopia de fluorescência por reflexão interna total (TIRF)
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Single-Molecule Imaging of Lateral Mobility and Ion Channel Activity in Lipid Bilayers using Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) Microscopy

Imagem de molécula única da mobilidade lateral e atividade do canal iônico em bicamadas lipídicas usando microscopia de fluorescência por reflexão interna total (TIRF)

DOI:
10.3791/64970-v

•

08:55 min

•

February 17, 2023

•

,
1Biophysics Department, Institute of Biomaterials and Biomolecular Systems,University of Stuttgart

Chapitres

  • 00:05Introduction
  • 00:43Preparation of Lipids and Agarose Hydrogel
  • 01:33PMMA Chamber Assembly and Lipid Monolayer Formation
  • 03:06Preparation of Lipid-Coated Aqueous Droplets in Hexadecane/Silicone Oil Solution
  • 04:17Preparation and Imaging of Single Ion Channels in DIB Membranes
  • 06:49Results: Isolation of TOM-CC and Correlation of Channel Activity with Lateral Mobility of TOM-CC
  • 08:18Conclusion

Summary

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Este protocolo descreve como usar a microscopia TIRF para rastrear canais iônicos individuais e determinar sua atividade em membranas lipídicas suportadas, definindo assim a interação entre o movimento da membrana lateral e a função do canal. Ele descreve como preparar as membranas, registrar os dados e analisar os resultados.

Tags

Keywords: Single-molecule ImagingLateral MobilityIon Channel ActivityLipid BilayersTotal Internal Reflection Fluorescence (TIRF) MicroscopyMembrane ProteinsDPhPCHexadecaneSilicone OilAgarose HydrogelPMMA Chamber

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