القياس الكمي لتعديلات هيستون العالمية بعد الترجمة باستخدام قياس التدفق الخلوي داخل النواة في الخلايا الدبقية الصغيرة لدماغ الفأر المعزول
September 15th, 2023
يصف هذا العمل بروتوكولا للقياس الكمي لتعديلات الهستون العالمية باستخدام قياس التدفق الخلوي داخل النواة في الخلايا الدبقية الصغيرة المعزولة في الدماغ. يحتوي العمل أيضا على بروتوكول عزل الخلايا الدبقية الصغيرة الذي تم استخدامه لجمع البيانات.
يهدف بحثنا إلى فهم الآليات التنظيمية الأساسية التي تتحكم في التعبير الجيني في الدماغ ، ونحن مهتمون بشكل خاص بفهم كيفية مساهمة تعطيل هذه الآليات في النمو العصبي والحالات العصبية والنفسية. نحن نركز على فهم كيفية تضافر عوامل الخطر الوراثية والبيئية لتغيير الوظيفة الخلوية وإنتاج إعاقات سلوكية. يتضمن هذا البروتوكول طرقا للفحص عالي الإنتاجية لتعديلات الهستون في الخلايا الدبقية الصغيرة المعزولة ، مما يسمح لنا بفحص العشرات من التعديلات اللاجينية المختلفة قبل الالتزام بالتسلسل عالي الإنتاجية ودراسات المتابعة الوظيفية.
يوفر بروتوكولنا مقاييس لتعديلات تاريخية عالمية مماثلة للمؤامرة الغربية. ومع ذلك ، فإن تقنيتنا أسرع ، وتتطلب عددا أقل من خلايا الإدخال ، وأكثر كمية ، ويمكن تعدد إرسالها.
نظرة عامة
تحدد هذه الدراسة بروتوكولاً لتحديد معدل التعديلات العالمية للهستونات باستخدام قياس التدفق الخلوي النووي المحدد في الخلايا الميكروغليا المعزولة من الدماغ. تهدف الدراسة إلى فهم الآليات التنظيمية الأساسية للتعبير الجيني في الدماغ، وتحديدًا كيفية ارتباط الاضطرابات بالاضطرابات العصبية التنموية والنفسية العصبية.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلم
- علم الأعصاب
- علم التخلق
- قياس التدفق الخلوي
الخلفية
- تركيز على تنظيم التعبير الجيني في الدماغ.
- استكشاف العوامل الوراثية والبيئية المرتبطة بالاضطرابات الدماغية.
- دور الخلايا الميكروغليا في الحالات التنموية العصبية والنفسية العصبية.
- تطوير بروتوكول فحص جديد عالي الإنتاجية.
غرض الدراسة
- توفير طريقة لتحديد معدل تعديلات الهستونات في الخلايا الميكروغليا.
- تسهيل فحص التعديلات الفوق وراثية قبل التحليل الإضافي.
- تعزيز فهم الوظائف الخلوية والضعف السلوكي المرتبط بالاضطرابات.
الطرق المستخدمة
- استخدام قياس التدفق الخلوي النووي لتحديد معدل تعديلات الهستونات.
- استخدم النموذج البيولوجي الخلايا الميكروغليا المعزولة من أنسجة الدماغ الفأرية.
- شملت البروتوكولات خطوات التخصيب المناعي وخطوات الطرد المركزي لعزل الخلايا.
- تم تقديم خطوات مفصلة لتحضير عينات الأنسجة والتحليل باستخدام أجسام مضادة محددة.
- عرض التحليل الإحصائي لتحديد معدل تعديلات الهستونات عبر قيم MFI.
النتائج الرئيسية
- إبراز زيادة في استيلهة الليزين 27 في الهستون H3 بسبب العلاج بالليبوبوليساكاريد.
- أظهرت النتائج تجمعات موزعة بشكل طبيعي مع تحولات ملحوظة في الفلوريسنس.
- قدمت رؤى كمية للمناظر الفوق وراثية والخلايا الميكروغليا والاستجابات الوظيفية.
- أظهر طريقة سريعة وفعالة مقارنة بالتقنيات التقليدية.
الاستنتاجات
- تدعم هذه الدراسة نهجًا أسرع وأكثر تحديدًا لدراسة تعديلات الهستونات في الخلايا الميكروغليا.
- تداعيات مهمة لفهم تأثير التغيرات الفوق وراثية على الاضطرابات العصبية التنموية والنفسية.
- تتيح الطريقة تحليلًا عالي الإنتاجية يمكن أن يسرع البحث في الاستجابات الخلوية وعلم الأعصاب.
الأسئلة الشائعة
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:04
Mouse Brain Dissection for Microglia Isolation
2:02
Mouse Brain Immune‐Enriched Fragment Isolation for Histone PTM Quantification
3:37
Mouse Brain Enriched Immune Pellet Plate Staining Method for Histone Quantification
4:48
Flow Cytometry and Data Analysis of Murine Brain Histone Post‐Translational Modifications
