La culture 3D d’organoïdes à partir de cryptes intestinales murines et d’une seule cellule souche pour la recherche organoïde
April 7th, 2023
Nous décrivons un protocole pour isoler les cryptes de l’intestin grêle murin et cultiver des organoïdes intestinaux 3D à partir des cryptes. De plus, nous décrivons une méthode pour générer des organoïdes à partir d’une seule cellule souche intestinale en l’absence d’une niche cellulaire sous-épithéliale.
Nos recherches portent sur la biologie des cellules souches, en particulier les cellules souches intestinales, présentes au fond de la crypte intestinale. L’objectif est de répondre à la question de savoir comment l’homéostasie est maintenue par la cellule souche dans l’intestin. Cette culture d’organes 3D dérivée de cellules souches intestinales fournit un outil puissant pour étudier la prolifération, la différenciation et le maintien des cellules souches.
La technologie des organes facilite la culture de cellules souches intestinales pendant longtemps en conservant le potentiel d’auto-renouvellement et de différenciation. L’organoïde a été largement utilisé pour les études de recherche fondamentale et translationnelle sur la fragilité intestinale et la fragilité passée. Notre défi actuel est de comprendre le système coronaire impliqué dans les cellules épithéliales intestinales et les cellules souches.
Comprendre les processus biologiques déclenchés par le clonage objectif est d’une importance capitale. L’une de nos découvertes importantes est que la signalisation par clonage maintient l’homéostasie de la croissance et de la différenciation épithéliales intestinales. Notre protocole décrit une méthode pour isoler systématiquement les cryptes de l’intestin grêle, et la culture ultérieure d’organoïdes 3D pour améliorer le taux de libération cryptale.
Nous établissons une méthode d’isolation mécanique impliquant des secousses vigoureuses, après traitement à l’EDTA. L’EDTA et la dissociation mécanique peuvent être combinés pour améliorer les rendements cryptaux. De plus, une compétence appropriée peut réduire la contamination virale au minimum, augmentant ainsi le nombre de cryptes.
Nos résultats suggèrent que la signalisation à travers les récepteurs musculaires et de l’organisme semble travailler ensemble pour maintenir l’homéostasie de la croissance et de la différenciation épithéliales intestinales. Cela nous encourage à émettre l’hypothèse que le système artéritique non neurocoronaire a joué un rôle important dans la modération de la niche des cellules souches intestinales.
Aperçu
Cette étude examine le maintien de l'homéostasie par les cellules souches intestinales à la base des cryptes intestinales murines. Les auteurs présentent un protocole détaillé pour isoler ces cryptes et cultiver des organoïdes 3D, améliorant notre compréhension du comportement des cellules souches dans le tractus gastro-intestinal.
Composantes clés de l'étude
Domaine de recherche
- Biologie des cellules souches intestinales
- Technologie de culture d'organoïdes
- Homéostasie dans les systèmes gastro-intestinaux
Contexte
- Les cellules souches intestinales sont essentielles pour maintenir l'intégrité épithéliale.
- Les organoïdes 3D sont efficaces pour étudier les propriétés des cellules souches.
- Comprendre les voies de signalisation est crucial pour l'homéostasie des tissus.
Méthodes utilisées
- Méthodes mécaniques et enzymatiques pour l'isolement des cryptes
- Intestin grêle murin comme système biologique
- Imagerie en direct et microscopie pour l'observation des organoïdes
Résultats principaux
- L'utilisation de l'EDTA et de la dissociation mécanique améliore le rendement des cryptes.
- Identification des voies de signalisation qui contribuent à l'homéostasie des cellules souches.
- Établissement d'une méthode fiable pour la culture d'organoïdes intestinaux.
Conclusions
- Cette étude fournit une méthodologie robuste pour la culture d'organoïdes intestinaux à partir de cryptes isolées.
- Les résultats améliorent la compréhension de la dynamique des cellules souches intestinales et de leur rôle dans le maintien épithélial.
