Embryonala stamceller-Derived endotelceller för behandling i bakdelen Ischemi
Summary
Det kirurgiska ingreppet för leverans av embryonala stamceller som härrör från endotelceller till ischemisk bakdelen visas, med icke-invasiv spårning av bioluminescens avbildning.
Abstract
Perifer arteriell sjukdom (PAD) resultat från förträngning av perifera artärer som försörjer syresatt blod och näringsämnen till benen och fötterna, orsakar denna patologi symtom som claudicatio intermittens (smärta med gå), smärtsamma ischemiska sår, eller till och med lem-hotande kallbrand. Det anses allmänt att det vaskulära endotelet, ett monolager av endotelceller som investerar luminala ytan av alla blod-och lymfkärl, spelar en dominerande roll i vaskulär homeostas och vaskulär förnyelse. Som ett resultat av stamceller-baserade förnyelse av endotelet kan vara en lovande metod för behandling av PAD.
I den här videon visar vi transplantation av embryonala stamceller (ESC) som härrör från endotelceller för behandling av ensidiga hindimb ischemi som en modell för PAD, följt av icke-invasiv spårning av cell målsökande och överlevnad av bioluminescens avbildning. De specifika material och metoder för cell-delivery and imaging kommer att beskrivas. Detta protokoll följer en annan publikation i att beskriva induktion i bakdelen ischemi av Niiyama et al. 1
Protocol
Discussion
Ekonomiska och sociala råd är en lovande cell källa för behandling av vävnaden ischemi på grund av deras plasticitet av differentiering och deras förmåga att ge upphov till cell linjer som omfattar alla tre groddblad, inklusive endotelceller. För att lösa de etiska problem förknippade med ekonomiska och sociala råd, kan inducerade pluripotenta stamceller (iPSCs) vara ett alternativ pluripotenta stamceller källa som överbryggar de etiska problem. Förutom ekonomiska och sociala råd, kan vuxna stamceller som endotelceller proge…
Acknowledgements
Författarna tackar Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Grant Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, VD, Tim Doyle, PhD, och Stanford Small Animal Imaging Core för tekniskt stöd. Författarna tackar också AM Bickford, Inc. för att stödja veterinär utrustning. Denna forskning stöddes av forskningsanslag från National Institutes of Health (R01 HL-75.774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), California tobaksrelaterade sjukdomar Research Program vid University of California (15IT-0257 och 1514RT-0169) och California Institute för regenerativ medicin (RS1-00.183).
NH stöds av ett stipendium från American Heart Association. kan Heart Association.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical tools | Tool | Fine Science Tools | ||
| Syringe needle | Tool | BD | 28G insulin syringe is preferred | |
| Phosphate Buffered Saline | Reagent | Invitrogen | ||
| D-luciferin | Reagent | Biosynth International, Inc | Prepare D-luciferin in advance into filtered stock solutions of 15 mg/mL in PBS | |
| IVIS 200 Bioluminescence imaging system and acquisition software | Equipment | Xenogen Corporation |
Riferimenti
- Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. JoVE. , (2008).
- Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. Endothelial cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).
- Yamashita, J., Itoh, H., Hirashima, M., Ogawa, M., Nishikawa, S., Yurugi, T., Naito, M., Nakao, K., Nishikawa, S. Flk1-positive cells derived from embryonic stem cells serve as vascular progenitors. Nature. 408, 926-926 (2000).
- De, A., Yaghoubi, S. S., Gambhir, S. S. Applications of lentiviral vectors in noninvasive molecular imaging. Methods Mol Biol. 433, 177-202 (2008).
- Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization. J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).
- Cook, M. J. The anatomy of the laboratory mouse. , (1976).
- Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. Bioluminescent indicators in living mammals. Nature Med. 4, 245-247 (1998).
- Ray, P., De, A., Min, J. J., Tsien, R. Y., Gambhir, S. S. Imaging tri-fusion multimodality reporter gene expression in living subjects. Cancer Res. 64, 1323-1330 (2004).
- Huang, N. F., Lee, R. J., Li, S. Chemical and physical regulation of stem cells and progenitor cells: potential for cardiovascular tissue engineering. Tissue Eng. 13, 1809-1823 (2007).
- Cao, F., Lin, S., Xie, X., Ray, P., Patel, M., Zhang, X., Drukker, M., Dylla, S. J., Connolly, A. J., Chen, X., Weissman, I. L., Gambhir, S. S., Wu, J. C. In vivo visualization of embryonic stem cell survival, proliferation, and migration after cardiac delivery. Circulation. 113, 1005-1114 (2006).
- Wilson, K., Yu, J., Lee, A., Wu, J. C. In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells. J Vis Exp. , (2008).
