Det kirurgiska ingreppet för induktion av ensidiga bakdelen ischemi visas, med bekräftelse av ischemi med laser Doppler perfusion imaging.
I USA påverkar perifer arteriell sjukdom (PAD) cirka 10 miljoner individer, och är också utbrett över hela världen. Medicinska behandlingar för att lindra symtomen är begränsade. Kirurgiska eller endovaskulära interventioner är användbara för vissa individer, men långsiktiga resultat är ofta en besvikelse. Som ett resultat finns det ett behov av att utveckla nya terapier för behandling av PAD. Den murina bakdelen ischemi preparat är en modell av PAD, och är användbar för att testa nya terapier. I jämförelse med andra modeller av vävnad ischemi, såsom koronar-eller cerebral artär ligation ger lårbensartären ligation för en enklare modell av ischemisk vävnad. Andra fördelar med denna modell är enkel åtkomst till femoralis och låg dödlighet.
I denna video visar vi metoden för mus modell av ensidiga hindimb ischemi. De specifika material och metoder för att skapa och utvärdera modellen kommer att beskrivas, inklusive bedömning av perfusion med laser Doppler imaging. Detta protokoll kan också användas för transplantation och icke-invasiv spårning av celler, vilket framgår av Huang et al. 1.
Det finns några källor till variabilitet att beakta i planeringen och genomförandet bakdelen ischemi modeller. Första kan graden av ischemi varierar beroende på var de ligering med avseende på den av sidogrenar. Därför för konsekvens av modellen, bör djuren genomgå samma nivå av arteriell ligatur. En annan källa till variabilitet i ischemisk återhämtning är relaterad till åldern på de djur, med unga djur (6-8 veckor) med snabbare och mer fullständig återhämtning priser än äldre djur (8-10 månader), som bedöms av hemodynamiska (dvs. laser Doppler perfusion) eller funktionella (dvs. löpband test) åtgärder. För studier där man bedömer en angiogena agent, kan det vara bättre att använda äldre djur, eftersom en större skillnad mellan grupperna kan ses med en terapeutisk intervention. Omvänt, för studier där man bedömer ett anti-angiogena faktorn, kan det vara bättre att använda yngre djur för att maximera 3 effektstorlek.
Om det utförs korrekt, borde det vara minimal komplikationer som blödningar, infektion eller dödlighet. Om blödning uppstår genom oavsiktlig störning av den femorala ven eller andra fartyg, måttligt tryck med en steril bomull tippas applikator eller gasbinda bör tillämpas på platsen för blödning tills blödningen stannar. Djur som visar tecken på infektion ska behandlas med anti-infektiösa agens. Djur som uppvisar betydande kallbrand kan behöva beeuthanized. Denna komplikation är vanligare hos äldre djur, och i vissa stammar, som BALB c möss 4. Dessutom kan den bakdelen ischemi-modellen orsaka mild till måttlig smärta. Därför bör analgetika såsom buprenorfin eller karprofen ges som behövs för behandling av smärta, enligt rekommendationer från IACUC.
Sammanfattningsvis har vi visat en enkel och reproducerbar metod för att studera PAD i en mus-modell i bakdelen ischemi. Den bakdelen ischemi modellen med laser Doppler bildanalys är ett utmärkt system för att studera vaskulära sjukdomar och för bedömning av terapeutiska kandidater.
Författarna tackar Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Grant Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, VD, Tim Doyle, PhD, och Stanford Small Animal Imaging Core för tekniskt stöd. Författarna tackar också AM Bickford, Inc. för att stödja veterinär utrustning. Denna forskning stöddes av forskningsanslag från National Institutes of Health (R01 HL-75.774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), California tobaksrelaterade sjukdomar Research Program vid University of California (15IT-0257 och 1514RT-0169) och California Institute för regenerativ medicin (RS1-00.183). NH stöds av ett stipendium från American Heart Association.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Surgical Tools | Tool | Fine Science Tools | ||
Constix Cotton Swabs | Tool | Contec | SC-4 | |
Betadine (Povidone-iodine) | Reagent | PDI | ||
70% alcohol | Reagent | Kendall | ||
Phosphate Buffered Saline | Reagent | Invitrogen | ||
7-0 silk suture | Tool | Genzyme | ||
5-0 vicryl suture | Tool | Ethicon | ||
Electric shaver | Tool | GE | ||
Cautery | Tool | Baxter | ||
Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System | Equipment | Perimed |