Микроконтактной печати белков для клеточной биологии
Summary
Микроконтактной печати широко используется для картины белков и других молекул на поверхности материалов. Мы продемонстрируем основные этапы этого процесса, штамповки модели фибронектина на стекло.
Abstract
Способность шаблон белков и других биомолекул на подложки важно для захвата пространственной сложности внеклеточной среде. Развитие микроконтактной печати группой Уайтсайдс (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> Http://gmwgroup.harvard.edu/</a>), В середине 1990-х revolutionalized этой области, сделав микроэлектроники / микротехнологий методы доступны для лабораторий направлены на науки о жизни. Первоначальные реализации этого метода полидиметилсилоксан (PDMS) марок, чтобы создать образцы функционализированных химических веществ на поверхности материалов<sup> 1</sup>. С тех пор ассортимент инновационных подходов были разработаны для картины других молекул, включая белки<sup> 2</sup>. Это видео демонстрирует основной процесс создания PDMS марки и использует их, чтобы картина белков, так как эти шаги трудно точно выразить словами. Мы ориентируемся на структурирование внеклеточного фибронектина белковой матрицы на стеклянные покровные качестве конкретного примера кучность стрельбы. Важной составляющей процесса печати микроконтактной является топологическим мастера, из которого отлиты марки; подниматься и опускаться регионов мастер отражаются в печать и определить окончательный узор. Как правило, мастера состоит из кремниевой пластины покрыты фоторезиста, а затем узорной с помощью фотолитографии, как это делается здесь. Создание мастеров содержащей определенной схеме требует специального оборудования, и лучше всего подошел по согласованию с центром изготовления или объекта. Однако почти любую подложку с топологией можно использовать в качестве мастера, такие как пластик дифракционные решетки (см. Реагенты для примера), и таких мастеров обеспечить счастливое доступными, простыми узорами. Этот протокол начинается в точке с мастером в руке.
Protocol
Discussion
Процесс микроконтакта печати концептуально простой и надежный в эксплуатации, будучи применены к структурирование широкого спектра молекул на различных подложках. Однако этот процесс остается чем-то вроде искусства. Конкретной геометрией картины должны быть созданы, белка, чтобы быть с рисунко…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Plasma Cleaner | Harrick Scientific Products, Inc. | PDC-32G | ||
| Desiccator | Nalgene | 5315-0150 | ||
| PBS | Reagent | Invitrogen | 10010-072 | |
| Protein labeling kit | Reagent | Invitrogen | A30006 | |
| Fibronectin | Reagent | Sigma-Aldrich | F2006 | |
| Staining rack | Reagent | Thomas Scientific | 8542E40 | |
| Coverslips | Reagent | Fisher Scientific | 12-544-12 | |
| Sylgard 184 | Reagent | Ellsworth Adhesives | 184 Sil Elast Kit | |
| Diffraction Grating | Reagent | Edmund Scientific | 3040267 |
Riferimenti
- Chen, C. S. Geometric control of cell life and death. Science. 276, 1425-1425 (1997).
- Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol “Ink” Followed by Chemical Etching. Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).
- St. John, P. M. Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).
- Kam, L., Boxer, S. G. Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes. Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).
- Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers. Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).
- Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).
- Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro. Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).
