細胞生物学のためのタンパク質のマイクロコンタクトプリンティング
Summary
マイクロコンタクトプリンティングは、材料の表面にパターンの蛋白質と他の分子に広く使用されています。我々は、ガラス上にフィブロネクチンのパターンをスタンプする、このプロセスの基本的な手順を示します。
Abstract
基板上へのパターンのタンパク質やその他の生体分子への能力は、細胞外環境の空間的な複雑さを捕捉するために重要です。ホワイトサイズグループによるマイクロコンタクトプリンティングの開発（<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> http://gmwgroup.harvard.edu/</a>）は、1990年代半ばにマイクロエレクトロニクス/ライフサイエンスに焦点を当てた研究室へのアクセス可能な微細加工技術を加えることによって、このフィールドをrevolutionalized。ポリジメチルシロキサン（PDMS）スタンプは、材料表面上の官能化学物質のパターンを作成するために使用されるこのメソッドの初期実装<sup> 1</sup>。それ以来、革新的なアプローチの範囲は、タンパク質を含む、パターンの他の分子に開発されている<sup> 2</sup>。このビデオでは、PDMSスタンプを作成するための基本的なプロセスを示しており、これらの手順が正確に言葉で表現するのは困難であるため、パターンの蛋白質にそれらを使用しています。我々は、パターン形成、パターニングの具体例として、ガラス製カバースリップ上に細胞外マトリックスタンパク質のフィブロネクチンに焦点を当てる。マイクロコンタクトプリンティングのプロセスの重要な構成要素は、スタンプがキャストされ、そこから位相的なマスター、です;マスターの昇降領域は、タイムスタンプにミラーリングして、最終的なパターンを定義している。一般的に、マスターはここで行われているように、フォトリソグラフィによってパターニングしてフォトレジストでコーティングし、シリコンウェハから構成されています。特定のパターンを含むマスターの作成には特殊な装置を必要とし、最高の製造センターや施設との協議に近づいている。しかし、トポロジーを持つほぼすべての基板は、プラスチック製の回折格子のようなマスター、（一例のための試薬を参照）として使用し、そしてそのような偶然のマスターは容易に利用できる、単純なパターンを提供することができます。このプロトコルは、手でマスターを持つことのポイントから開始されます。
Protocol
Discussion
マイクロコンタクトプリンティングのプロセスは、パターニング基板のさまざまな分子の広い範囲をに適用されたこと、概念的に単純で非常に堅牢です。しかし、このプロセスはアートのようなもののまま。特定の作成されるパターンの形状、パターン化される蛋白質、適用される重量、およびコーティング/プレス条件は、すべてのスタンプ品質に影響を与えます。たとえば、しばしば大規模な機能を、図…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Plasma Cleaner | Harrick Scientific Products, Inc. | PDC-32G | ||
| Desiccator | Nalgene | 5315-0150 | ||
| PBS | Reagent | Invitrogen | 10010-072 | |
| Protein labeling kit | Reagent | Invitrogen | A30006 | |
| Fibronectin | Reagent | Sigma-Aldrich | F2006 | |
| Staining rack | Reagent | Thomas Scientific | 8542E40 | |
| Coverslips | Reagent | Fisher Scientific | 12-544-12 | |
| Sylgard 184 | Reagent | Ellsworth Adhesives | 184 Sil Elast Kit | |
| Diffraction Grating | Reagent | Edmund Scientific | 3040267 |
Riferimenti
- Chen, C. S. Geometric control of cell life and death. Science. 276, 1425-1425 (1997).
- Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol “Ink” Followed by Chemical Etching. Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).
- St. John, P. M. Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).
- Kam, L., Boxer, S. G. Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes. Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).
- Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers. Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).
- Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).
- Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro. Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).
