Microcontacto de impresión de las proteínas de Biología Celular
Summary
Impresión por microcontacto se utiliza ampliamente a las proteínas de patrones y otras moléculas en las superficies de material. Se demuestra los pasos básicos de este proceso, los patrones de estampación de la fibronectina sobre el cristal.
Abstract
La capacidad de las proteínas y otras biomoléculas patrón sobre sustratos es importante para captar la complejidad espacial del medio ambiente extracelular. Desarrollo de la imprenta microcontacto por el grupo de Whitesides (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> Http://gmwgroup.harvard.edu/</a>) A mediados de la década de 1990 revolucionó este campo, haciendo de la microelectrónica / técnicas de microfabricación acceso a los laboratorios se centraron en las ciencias de la vida. Las implementaciones iniciales de este método de polidimetilsiloxano (PDMS) sellos para crear patrones de productos químicos en las superficies de materiales funcionalizados<sup> 1</sup>. Desde entonces, una serie de enfoques innovadores han sido desarrollados para las moléculas de otro patrón, incluyendo las proteínas<sup> 2</sup>. Este vídeo muestra el proceso básico de creación de sellos de PDMS y las utiliza para las proteínas patrón, ya que estas medidas son difíciles de expresar con precisión en las palabras. Nos centramos en los patrones de la matriz proteica extracelular fibronectina en cubreobjetos de vidrio como un ejemplo específico de los patrones. Un componente importante del proceso de impresión por microcontacto es un maestro topológica, de la que los sellos son emitidos, las regiones de subir y bajar del maestro se reflejan en la marca y definir el modelo final. Por lo general, un maestro consiste en una oblea de silicio recubierto con fotorresistencia y modelada por fotolitografía como se hace aquí. La creación de los maestros que contienen un patrón específico requiere equipo especializado, y se aborda mejor en consulta con un centro de fabricación o instalación. Sin embargo, casi cualquier sustrato con la topología se puede utilizar como un maestro, como redes de difracción de plástico (ver Reactivos para un ejemplo), y como maestros casual proporcionar fácilmente disponible, los patrones de simple. Este protocolo se inicia en el punto de tener un maestro en la mano.
Protocol
Discussion
El proceso de impresión por microcontacto es conceptualmente simple y muy robusto, que se ha aplicado a los patrones de una amplia gama de moléculas en una variedad de sustratos. Sin embargo, este proceso sigue siendo algo de un arte. La geometría específica del modelo que se creó, la proteína a ser modelado, el peso aplicado, y el recubrimiento / sellado todas las condiciones de afectar la calidad de estampado. Por ejemplo, poco peso, aplicada a grandes rasgos, a menudo resulta en diferencias en el patrón como se puede ver en el log…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Plasma Cleaner | Harrick Scientific Products, Inc. | PDC-32G | ||
| Desiccator | Nalgene | 5315-0150 | ||
| PBS | Reagent | Invitrogen | 10010-072 | |
| Protein labeling kit | Reagent | Invitrogen | A30006 | |
| Fibronectin | Reagent | Sigma-Aldrich | F2006 | |
| Staining rack | Reagent | Thomas Scientific | 8542E40 | |
| Coverslips | Reagent | Fisher Scientific | 12-544-12 | |
| Sylgard 184 | Reagent | Ellsworth Adhesives | 184 Sil Elast Kit | |
| Diffraction Grating | Reagent | Edmund Scientific | 3040267 |
Riferimenti
- Chen, C. S. Geometric control of cell life and death. Science. 276, 1425-1425 (1997).
- Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol “Ink” Followed by Chemical Etching. Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).
- St. John, P. M. Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).
- Kam, L., Boxer, S. G. Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes. Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).
- Kung, L. A., Kam, L., Hovis, J. S., Boxer, S. G. Patterning Hybrid Surfaces of Proteins and Supported Lipid Bilayers. Langmuir. 16, 6773-6773 (2000).
- Shen, K., Thomas, V. K., Dustin, M. L., Kam, L. C. Micropatterning of costimulatory ligands enhances CD4+ T cell function. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7791-7791 (2008).
- Shi, P., Shen, K., Kam, L. C. Local presentation of L1 and N-cadherin in multicomponent, microscale patterns differentially direct neuron function in vitro. Developmental Neurobiology. 67, 1765-1765 (2007).
