Summary
Tradycyjnie w pionie kawałek i cały montażu przygotowanie siatkówce były używane w badaniach funkcji siatkówki obwodów. Poniżej opiszemy powieści krojenia metody zachowania dendrytycznych morfologii neuronów siatkówki nienaruszone.
Abstract
Tradycyjnie w pionie kawałek i cały montażu przygotowanie siatkówce były używane w badaniach funkcji siatkówki obwodów. Jednak wiele neuronów siatkówki, takie jak amacrine komórek, rozszerzać swoją dendrytów poziomo, tak że morfologia komórek ma być poważnie uszkodzony w pionowe plastry. W całym montażu przygotowania, zwłaszcza dla patch-clamp nagrań neuronów siatkówki w środkowej warstwie nie są łatwo dostępne ze względu na rozległy zasięg glejowych komórek (komórki Mueller) endfeets s. Poniżej opiszemy powieści krojenia metody zachowania dendrytycznych morfologii neuronów siatkówki nienaruszone. Kawałek został poziomo po wewnętrznej warstwy siatkówki za pomocą vibratome Krajalnica po siatkówki został osadzony w niskiej temperaturze topnienia żelu agarozowym. W tym poziome przygotowania kawałek siatkówki, badanych przez nas funkcji neuronów siatkówki w porównaniu z ich morfologii, za pomocą patch-clamp nagrywania, techniki obrazowania wapnia, immunocytochemii i pojedynczych komórek RT-PCR.
Protocol
Discussion
Istnieje kilka ważnych zalet poziomej przygotowania kawałek siatkówki.
Po pierwsze, morfologii komórek, które rozszerzają się dendrytów w poziomie, jak amacrine i komórki w poziomie, jest zachowany. Wykazano, że istnieje ponad 20 rodzajów amacrine komórek w siatkówce (MacNeil i Masland, 1998), tak że jest bardzo ważne dla porównania morfologii komórek fizjologiczne własności.
Po drugie, w całym montażu siatkówki, obszerne relacje z komórek glejowych s endfeets uniemożliwia dostęp do pipet patch do am…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dziękujemy dr. Richard H. Masland i Akimichi Kaneko za udzielenie nam cennych rad i sugestii w celu ustalenia procedury poziomej przygotowania kawałek siatkówki.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Sigma | A-1296 | ||
| Agarose L | Wako | 317-01182 | Low-temperature melting agarose | |
| Hyaluronidase | Sigma | Type I-S, 300 units/mg | ||
| Medium | in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames’ Solution (Sigma) | |||
| Microwave | ||||
| Hot water bath | 35 C | |||
| Vibratome slicer | Leica | VT1000S | ||
| MF-Membrane filters | Millipore | HAWP01300 | Filter paper , pore size 0.45 um | |
| Dissection tools | forceps, blade, pinch, twizzer, etc. | |||
| Instant glue | eg., Alonalpha, Krazy Glu | |||
| 50 ml syringe | ||||
| syringe filter | Millipore | SX0001300 |
Riferimenti
- Azuma, T., Enoki, R., Iwamuro, K., Kaneko, A., Koizumi, A., Koizumi, A., TC, J. a. k. o. b. s., Masland, R. H., MA, M. a. c. N. e. i. l., RH, M. a. s. l. a. n. d. Multiple spatiotemporal patterns of dendritic Ca2+ signals in goldfish retinal amacrine cells. Brain Res. , 64-73 (2004).
