Microinjection من البويضات المورق القيطم
Summary
هنا علينا أن نظهر للحشوية microinjection<em> القيطم المورق</em> البويضات مع ركيزة استيراد النووية ، فضلا عن التحضير للحقن البويضات عن التصور بواسطة المجهر الإلكتروني رقيقة sectioning.
Abstract
Microinjection من البويضات المورق القيطم تليها رقيقة sectioning المجهر الإلكتروني (EM) هو نظام ممتاز لدراسة نقل النواة للهيولى. بسبب نواته كبيرة وكثافة عالية من المسام المجمعات النووية (الشخصيات) ، يمكن أن يكون النقل النووي بسهولة في البويضة القيطم. وقد اكتسبت الكثير من التبصر في آليات الاستيراد والتصدير النووي من خلال استخدام هذا النظام (استعرضها Panté ، 2006). بالإضافة إلى ذلك ، فقد استخدمنا microinjection من البويضات لتشريح الضفدع مسارات استيراد النووية عدة من الفيروسات التي تتكاثر في النواة المضيفة.
نحن هنا لشرح microinjection هيولي من البويضات القيطم مع ركيزة استيراد النووية. نعرض أيضا إعداد البويضات لحقن التصور بواسطة رقيقة sectioning EM ، بما في ذلك تشريح ، والجفاف ، وتضمينها في البويضات الى الراتنج الايبوكسي التضمين. أخيرا ، ونحن نقدم نتائج ممثل عن البويضات التي تم microinjected مع قفيصة من nucleopolyhedrovirus الفيروسة العصوية californica Autographa (AcMNPV) أو فيروس البارفو اللحظة من الفئران (MVM) ، ومناقشة التطبيقات الممكنة لهذه التقنية.
Protocol
Discussion
Microinjection من البويضات القيطم جنبا إلى جنب مع رقيقة sectioning EM هو أداة فعالة للغاية لدراسة نقل النواة للهيولى. وقد استخدم هذا النظام لخريطة خطوات متميزة من الاستيراد عن طريق مجلس الشعب ، على سبيل المثال من التفاعل ركيزة النووية مع استيراد المكونات الهيكلية للمجلس الو…
Acknowledgements
نشكر ديفيد Theilmann (المحيط الهادئ الأغذية الزراعية مركز البحوث ، سمرلاند ، كولومبيا البريطانية) لتوفير AcMNPV الفيروسة العصوية ومفيدة للمناقشة.
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المؤسسة الكندية للابتكار (CFI) ، والمعاهد الكندية للأبحاث الصحية (CIHR) ، ومؤسسة مايكل سميث للبحوث الصحية (MSFHR) ، والعلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا (NSERC) .
Riferimenti
- Panté, N. Use of intact Xenopus oocytes in nucleocytoplasmic transport studies. Methods Mol. Biol. 322, 301-314 (2006).
- Panté, N., Kann, M. Nuclear pore complex is able to transport macromolecules with diameters of about 39 nm. Mol. Biol. Cell. 13 (2), 425-434 (2002).
- Rabe, B., Vlachou, A., Panté, N., Helenius, N., Kann, M. Nuclear import of hepatitis B virus capsids and release of the viral genome. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (17), 9849-9854 (2003).
- Cohen, S., Panté, N. Pushing the Envelope: Microinjection of MVM into Xenopus oocytes causes damage to the nuclear envelope. J. Gen. Virol. 86 (12), 3243-3252 (2005).
- Panté, N., Jarmolowski, A., Izaurralde, E., Sauder, U., Baschong, W., Mattaj, I. W. Visualizing nuclear export of different classes of RNA by electron microscopy. RNA. 3, 498-513 (1997).
