Xenopus Laevis의 Oocytes의 Microinjection
Summary
여기의 세포질 microinjection을 보여주<em> Xenopus laevis</em핵 수입 기판뿐만 아니라 박막 sectioning 전자 현미경에 의해 시각화를위한 주입 oocytes의 준비> oocytes.
Abstract
얇은 sectioning 전자 현미경 (EM) 다음 Xenopus laevis의 oocytes의 Microinjection은 nucleocytoplasmic 전송을 공부하고있는 훌륭한 시스템입니다. 때문에 대형 핵 및 핵 기공 단지 (NPCs)의 높은 밀도, 핵 수송 Xenopus oocyte의 시각에서 쉽게하실 수 있습니다. 원자력 수출입의 메커니즘에 많은 통찰력이 시스템의 사용 (Panté 2006 년 검토)를 통해 얻은되었습니다. 또한, 우리는 호스트 핵의 복제 여러 바이러스의 핵 수입 경로를 해부하다에 Xenopus의 oocytes의 microinjection을 사용했습니다.
여기서 우리는 핵 수입 기판과 Xenopus의 oocytes의 세포질 microinjection을 보여줍니다. 우리는 또한에 의해 시각화를위한 주입 oocytes의 준비를 보여 얇은 sectioning 해부, 탈수, 그리고 에폭시 수지에 포함 oocytes의 포함 포함 EM합니다. 마지막으로, 우리는 baculovirus Autographa californica의 nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) 또는 마우스 (MVM)의 파르 보 바이러스의 할인 바이러스의 capsid와 microinjected, 그리고 기술의 잠재적인 응용 프로그램을 논의했습니다 oocytes에 대한 대표적인 결과를 제공합니다.
Protocol
Discussion
얇은 sectioning EM과 함께 Xenopus의 oocytes의 Microinjection은 nucleocytoplasmic 전송을 연구를위한 매우 효과적인 도구입니다. 이 시스템은 같은 세포질 섬유와 핵 바구니 (Panté 2006에서 검토)로 NPC의 구조 구성 요소와 핵 수입 기판의 예를 들어 상호 작용에 대해, NPC를 통해 수입의 서로 다른 단계를 매핑하는 데 사용되었습니다. 또한 원자력 복제 바이러스의 핵 수입 (; 레이브 외, 2003;. 코헨…
Acknowledgements
우리는 baculovirus의 AcMNPV를 제공하고 도움 토론 데이비드 Theilmann을 (태평양 아그리 – 식품 연구 센터, 섬머, 브리티시 컬럼비아) 감사드립니다.
이 작품은 혁신에 대한 캐나다 재단 (CFI), 보건 연구 (CIHR), 보건 연구 (MSFHR)의 마이클 스미스 재단의 캐나다 연구소, 그리고 자연 과학 및 캐나다의 공학 연구 협의회 (NSERC)에서 부여로 지원이 .
Riferimenti
- Panté, N. Use of intact Xenopus oocytes in nucleocytoplasmic transport studies. Methods Mol. Biol. 322, 301-314 (2006).
- Panté, N., Kann, M. Nuclear pore complex is able to transport macromolecules with diameters of about 39 nm. Mol. Biol. Cell. 13 (2), 425-434 (2002).
- Rabe, B., Vlachou, A., Panté, N., Helenius, N., Kann, M. Nuclear import of hepatitis B virus capsids and release of the viral genome. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (17), 9849-9854 (2003).
- Cohen, S., Panté, N. Pushing the Envelope: Microinjection of MVM into Xenopus oocytes causes damage to the nuclear envelope. J. Gen. Virol. 86 (12), 3243-3252 (2005).
- Panté, N., Jarmolowski, A., Izaurralde, E., Sauder, U., Baschong, W., Mattaj, I. W. Visualizing nuclear export of different classes of RNA by electron microscopy. RNA. 3, 498-513 (1997).
