ذبابة الفاكهة تشريح اليرقات NMJ
Summary
هذا البروتوكول يوضح كيفية تشريح<em> ذبابة الفاكهة</em> اليرقات في إعداد و / أو التصوير المناعية من مفترق الطرق العصبية والعضلية.
Abstract
و<em> ذبابة الفاكهة</em> الوصل العصبي العضلي (NMJ) هو نظام يستخدم نموذج المتبع لدراسة تطوير واللدونة متشابك. استخدام على نطاق واسع<em> ذبابة الفاكهة</em> محرك النظام هو نتيجة لسهولة الوصول إليها عالية. ويمكن تحليل ذلك مع قرار وحيد الخلية. هناك 30 في عضلات hemisegment الذين الترتيب داخل جدار الجسم هامشية معروفة. مجموعه من الخلايا العصبية الحركية 35 نعلق على هذه العضلات في النمط الذي الدقة العالية. استخدام البيولوجيا الجزيئية وعلم الوراثة ، ويمكن للمرء أن خلق حيوانات معدلة وراثيا أو المسوخ. ثم ، يمكن للمرء أن دراسة الآثار التنموية على التشكل وظيفة NMJ. من أجل الوصول إلى NMJ للدراسة ، فمن الضروري أن يشرح بعناية كل يرقة. نحن في هذه المقالة شرح كيفية تشريح صحيح<em> ذبابة الفاكهة</em> اليرقات لدراسة NMJ عن طريق إزالة جميع الأعضاء الداخلية في حين ترك جدار الجسم سليما. هذا الأسلوب هو مناسب لاعداد اليرقات التصوير ، والمناعية ، أو الكهربية.
Protocol
Discussion
ويمكن استخدام هذه التقنية أظهر تشريح في هذا الفيديو لإعداد يرقات ذبابة الفاكهة لمجموعة متنوعة من التقنيات التجريبية. إذا به بروتين فلوري موجودة ، ويمكن تحميل واليرقات والتقط على الفور. خلاف ذلك ، يمكن أن يؤديها من أجل immunostaining علامة مقصورات متشابك محددة. بالإضاف…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss | 000000-1063-181 | ||
| 3mm Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools Inc. | 15000-0 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | Long forceps | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | Short forceps | |
| SylGard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning Corp. | 3097358-1004 | Used to make dissection plates | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich Inc. | 252549-25ML | ||
| Stainless Steel Minutien Pins -0.1 MM Diameter | Fine Science Tools Inc. | 26002-10 |
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila. Cell. , 73-1137 (1993).
- Feng, . A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).
