Method Article

Drosophila larvali NMJ Dissection

DOI:

10.3791/1107

⸱

February 4th, 2009

 ,  , 
1Department of Physiology and Cellular Biophysics, Columbia University College of Physicians and Surgeons

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo protocollo dimostra come sezionare Drosophila in preparazione per immunoistochimica e / o immagini della giunzione neuromuscolare.

Protocol

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Prima di iniziare

  1. Tutte le culture devono essere coltivate a 25 ° C.
  2. HL3.1 tampone dissezione può essere preparata in anticipo. Prendete un aliquota 50 ml di HL3.1 e tenerlo in ghiaccio.
  3. Preparare 15 ml di fresca formaldeide 3,5% nel HL3.1. Tenerlo in ghiaccio.

Dissezione larvale

  1. Mettere una goccia di freddo HL3.1 sul piatto dissezione. Ciò manterrà l'animale da essiccazione e stordire l'animale che lo rende più facile lavorare con.
  2. Utilizzando le pinze lunghe, selezionare un errante larva terzo instar e inserirlo nel menu di HL3.1.
  3. In primo luogo....

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Discussion

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La tecnica di dissezione dimostrato in questo video può essere utilizzato per preparare le larve di Drosophila per una varietà di tecniche sperimentali. Se i tag proteina fluorescente sono presenti, le larve possono essere montati e ripreso immediatamente. Altrimenti, immunostaining può essere effettuata in modo da segnare specifici comparti sinaptica. Inoltre, elettrofisiologia può essere facilmente effettuata sulla larve sezionato per valutare il funzionamento della neurotrasmissione.

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Materials

HL3 Buffer Dissection: (in mm) 70 NaCl, 5 KCl, 0,2 CaCl2, 20 MgCl2, 10 NaHCO3, 5 trealosio, 115 saccarosio, e 5 HEPES, pH 7.3.
Sylgard Piastra dissezione: Mescolare delicatamente (per evitare le bolle) 10:1 in un bicchiere. Versare il composto nella piastra di Petri (qualsiasi dimensione). Lasciare SylGard per curare una notte in incubatrice 37C.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
  2. Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....

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Drosophila Larvae DissectionNeuromuscular Junction DissectionDrosophila NMJ PreparationLarval Body Wall PreparationHL 3 1 Buffer UseOrgan Removal TechniqueMuscle Preservation MethodPinning Procedure StepsFixation Protocol StepsDrosophila Larval Anatomy

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