ड्रोसोफिला लारवल NMJ विच्छेदन
Summary
इस प्रोटोकॉल को दर्शाता है कैसे काटना<em> ड्रोसोफिला</em> Immunohistochemistry और / या neuromuscular जंक्शन इमेजिंग के लिए तैयारी में लार्वा.
Abstract
<em> ड्रोसोफिला</em> Neuromuscular जंक्शन (NMJ) एक स्थापित मॉडल synaptic विकास और plasticity के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया प्रणाली है. के व्यापक उपयोग<em> ड्रोसोफिला</em> मोटर प्रणाली अपने उच्च पहुँच के लिए कारण है. यह एकल कोशिका संकल्प के साथ विश्लेषण किया जा सकता है. Hemisegment 30 प्रति मांसपेशियों जिनकी व्यवस्था परिधीय शरीर दीवार के भीतर जाना जाता है. कुल 35 मोटर न्यूरॉन्स के एक पैटर्न है कि उच्च विश्वस्तता में इन मांसपेशियों को देते हैं. आणविक जीव विज्ञान और आनुवंशिकी का प्रयोग, एक ट्रांसजेनिक जानवरों या म्यूटेंट बना सकते हैं. फिर, एक NMJ की आकारिकी और समारोह पर विकास परिणाम का अध्ययन कर सकते हैं. आदेश में अध्ययन के लिए NMJ का उपयोग करने के लिए, यह आवश्यक है ध्यान से प्रत्येक लार्वा काटना. हम इस लेख में प्रदर्शन कैसे ठीक से काटना<em> ड्रोसोफिला</em> NMJ के अध्ययन के लिए सभी आंतरिक अंगों को हटाने जबकि शरीर की दीवार बरकरार जा द्वारा लार्वा. इस तकनीक इमेजिंग, immunohistochemistry, या इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के लिए लार्वा तैयार करने के लिए उपयुक्त है.
Protocol
Discussion
विच्छेदन इस वीडियो में प्रदर्शन तकनीक प्रयोगात्मक तकनीकों की एक किस्म के लिए ड्रोसोफिला लार्वा तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यदि फ्लोरोसेंट प्रोटीन टैग मौजूद हैं, लार्वा और रखा जा सक…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss | 000000-1063-181 | ||
| 3mm Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools Inc. | 15000-0 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | Long forceps | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | Short forceps | |
| SylGard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning Corp. | 3097358-1004 | Used to make dissection plates | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich Inc. | 252549-25ML | ||
| Stainless Steel Minutien Pins -0.1 MM Diameter | Fine Science Tools Inc. | 26002-10 |
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila. Cell. , 73-1137 (1993).
- Feng, . A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).
