Drosophila larvali NMJ Dissection

Sommario

Questo protocollo dimostra come sezionare Drosophila in preparazione per immunoistochimica e / o immagini della giunzione neuromuscolare.

Protocollo

Prima di iniziare

1. Tutte le culture devono essere coltivate a 25 ° C.
2. HL3.1 tampone dissezione può essere preparata in anticipo. Prendete un aliquota 50 ml di HL3.1 e tenerlo in ghiaccio.
3. Preparare 15 ml di fresca formaldeide 3,5% nel HL3.1. Tenerlo in ghiaccio.

Dissezione larvale

1. Mettere una goccia di freddo HL3.1 sul piatto dissezione. Ciò manterrà l'animale da essiccazione e stordire l'animale che lo rende più facile lavorare con.
2. Utilizzando le pinze lunghe, selezionare un errante larva terzo instar e inserirlo nel menu di HL3.1.
3. In primo luogo....

Discussione

La tecnica di dissezione dimostrato in questo video può essere utilizzato per preparare le larve di Drosophila per una varietà di tecniche sperimentali. Se i tag proteina fluorescente sono presenti, le larve possono essere montati e ripreso immediatamente. Altrimenti, immunostaining può essere effettuata in modo da segnare specifici comparti sinaptica. Inoltre, elettrofisiologia può essere facilmente effettuata sulla larve sezionato per valutare il funzionamento della neurotrasmissione.

Materiali

HL3 Buffer Dissection: (in mm) 70 NaCl, 5 KCl, 0,2 CaCl2, 20 MgCl2, 10 NaHCO3, 5 trealosio, 115 saccarosio, e 5 HEPES, pH 7.3.
Sylgard Piastra dissezione: Mescolare delicatamente (per evitare le bolle) 10:1 in un bicchiere. Versare il composto nella piastra di Petri (qualsiasi dimensione). Lasciare SylGard per curare una notte in incubatrice 37C.