Дрозофилы личинок NMJ Dissection
Summary
Этот протокол свидетельствует о том, как рассекают<em> Drosophila</em> Личинок в подготовке к иммуногистохимии и / или изображений нервно-мышечном соединении.
Abstract
<em> Drosophila</em> Нервно-мышечном соединении (NMJ) является создана модель системы, используемой для исследования синаптических развития и пластичности. Широкое использование<em> Drosophila</em> Двигательного аппарата связано с его высокой доступности. Это могут быть проанализированы с одноклеточных разрешения. Есть 30 мышцы в hemisegment которого механизмом в рамках периферийной стенке тела известны. В общей сложности 35 моторных нейронов придают эти мышцы в шаблон, который имеет высокую точность. Использование молекулярной биологии и генетики, можно создать трансгенных животных или мутанты. Затем, можно изучать последствия развития на морфологию и функцию NMJ. Чтобы получить доступ к NMJ для изучения, необходимо тщательно анализировать каждую личинку. В этой статье мы покажем, как правильно препарировать<em> Drosophila</em> Личинок для изучения NMJ, удалив все внутренние органы, оставляя стенки тела нетронутой. Этот метод подходит для подготовки личинок для работы с изображениями, иммуногистохимии, или электрофизиологии.
Protocol
Discussion
Рассечение технику продемонстрировал в этом видео можно использовать для подготовки дрозофилы личинок для различных экспериментальных методик. Если флуоресцентные метки белка присутствуют, личинки могут быть смонтированы и отображаемого сразу. В противном случае, иммунной мог…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss | 000000-1063-181 | ||
| 3mm Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools Inc. | 15000-0 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | Long forceps | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | Short forceps | |
| SylGard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning Corp. | 3097358-1004 | Used to make dissection plates | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich Inc. | 252549-25ML | ||
| Stainless Steel Minutien Pins -0.1 MM Diameter | Fine Science Tools Inc. | 26002-10 |
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila. Cell. , 73-1137 (1993).
- Feng, . A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).
