Detta protokoll visar hur man dissekera<em> Drosophila</em> Larver som förberedelse för immunohistokemi och / eller avbildning av den neuromuskulära förbindelsen.
Abstract
Den<em> Drosophila</em> Neuromuskulära förbindelsen (NMJ) är en etablerad modell som används för studier av synaptiska utveckling och plasticitet. Den utbredda användningen av<em> Drosophila</em> Motorn är på grund av sin höga tillgänglighet. Den kan analyseras med encelliga upplösning. Det finns 30 muskler per hemisegment vars arrangemang inom det perifera kroppen väggen är kända. Totalt 35 motoriska nervceller fäster dessa muskler i ett mönster som har hög trohet. Använda molekylärbiologi och genetik, kan man skapa transgena djur eller mutanter. Sedan kan man studera utveckling konsekvenser på morfologi och funktion NMJ. För att få tillgång till NMJ för studien, är det nödvändigt att noggrant dissekera varje larv. I den här artikeln visar vi hur man korrekt att dissekera<em> Drosophila</em> Larver för studier av NMJ genom att ta bort alla inre organ medan kroppen vägg intakt. Detta är lämpligt att förbereda larver för avbildning, immunohistokemi eller elektrofysiologi.
Protocol
Innan du börjar Alla kulturer bör odlas vid 25 ° C. HL3.1 dissektion buffert kan beredas i förväg. Ta en 50 ml alikvot av HL3.1 och hålla den på is. Förbered 15 ml färsk 3,5% Formaldehyd i HL3.1. Håll det på is. Larver Dissection Sätt en droppe kallt HL3.1 på dissekering plattan. Detta kommer att hålla djuret från att torka och bedöva djuret gör det lättare att arbeta med. Med hjälp av lång pincett,</strong…
Discussion
Den dissekering tekniken demonstreras i denna video kan användas för att förbereda Drosophila larver för en mängd olika experimentella tekniker. Om fluorescerande proteinet taggar är närvarande, kan larverna monteras och avbildas direkt. Annars kan immunfärgning göras för att markera specifika synaptisk fack. Dessutom kan elektrofysiologi enkelt utföras på dissekerade larver för att utvärdera hur neurotransmission.
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.