Bu protokol incelemek için nasıl gösterir<em> Drosophila</em> Immünhistokimya ve / veya nöromüsküler kavşak görüntüleme için hazırlık larvaları.
Abstract
<em> Drosophila</em> Nöromüsküler bileşke (NMJ), sinaptik geliştirme ve plastisite çalışma için kullanılan bir model sistem. Yaygın kullanımı<em> Drosophila</em> Motor sistemi, yüksek erişilebilirlik nedeniyle. Bu tek hücreli çözünürlük ile analiz edilebilir. Düzenleme periferik vücut duvarı içinde bilinen hemisegment başına 30 kas vardır. Toplam 35 motor nöronların yüksek sadakat olan bir model bu kaslara takın. Moleküler biyoloji ve genetik kullanarak, transgenik hayvanlar veya mutantlar oluşturabilirsiniz. Sonra, bir gelişimsel sonuçları NMJ morfolojisi ve fonksiyonu üzerine çalışma. Çalışma için NMJ erişmek için, her larva dikkatlice incelemek için gereklidir. Bu yazıda, düzgün bir şekilde incelemek için nasıl gösterilmektedir<em> Drosophila</em> Vücut duvarı olduğu gibi bırakarak, tüm iç organları kaldırarak NMJ çalışma larvaları. Bu teknik, görüntüleme, immünhistokimya, ya da elektrofizyoloji larvaları hazırlamak için uygundur.
Protocol
Başlamadan önce Bütün kültürler, 25 ° C'de yetiştirilebilir. HL3.1 diseksiyonu tampon önceden hazırlanmış olabilir. HL3.1 50 ml'lik bir kısım alın ve buz üzerinde tutmak. HL3.1 15 ml taze% 3.5 Formaldehit hazırlayın. Buz üzerinde tutun. Larvaların Diseksiyon Diseksiyon plaka HL3.1 soğuk bir damla koyun. Bu daha kolay çalışmak için hayvan kurutma ve sersemletici hayvan tutacaktır. Uzun forseps<…
Discussion
Bu videoda gösterilen diseksiyon tekniği çeşitli deneysel teknikler Drosophila larvaları hazırlamak için kullanılabilir. Flüoresan protein etiketleri varsa, larva monte ve anında görüntülü olabilir. Aksi takdirde, immün belirli sinaptik bölmeleri işaretlemek için yapılabilir. Buna ek olarak, elektrofizyoloji kolayca nörotransmisyon işleyişini değerlendirmek için disseke larvaları olabilir.
Drosophila NMJ temel yapısı ve işlevi aydınlatılan ilk …
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.