Drosophila Larvaların NMJ Diseksiyon
Summary
Bu protokol incelemek için nasıl gösterir<em> Drosophila</em> Immünhistokimya ve / veya nöromüsküler kavşak görüntüleme için hazırlık larvaları.
Abstract
<em> Drosophila</em> Nöromüsküler bileşke (NMJ), sinaptik geliştirme ve plastisite çalışma için kullanılan bir model sistem. Yaygın kullanımı<em> Drosophila</em> Motor sistemi, yüksek erişilebilirlik nedeniyle. Bu tek hücreli çözünürlük ile analiz edilebilir. Düzenleme periferik vücut duvarı içinde bilinen hemisegment başına 30 kas vardır. Toplam 35 motor nöronların yüksek sadakat olan bir model bu kaslara takın. Moleküler biyoloji ve genetik kullanarak, transgenik hayvanlar veya mutantlar oluşturabilirsiniz. Sonra, bir gelişimsel sonuçları NMJ morfolojisi ve fonksiyonu üzerine çalışma. Çalışma için NMJ erişmek için, her larva dikkatlice incelemek için gereklidir. Bu yazıda, düzgün bir şekilde incelemek için nasıl gösterilmektedir<em> Drosophila</em> Vücut duvarı olduğu gibi bırakarak, tüm iç organları kaldırarak NMJ çalışma larvaları. Bu teknik, görüntüleme, immünhistokimya, ya da elektrofizyoloji larvaları hazırlamak için uygundur.
Protocol
Discussion
Bu videoda gösterilen diseksiyon tekniği çeşitli deneysel teknikler Drosophila larvaları hazırlamak için kullanılabilir. Flüoresan protein etiketleri varsa, larva monte ve anında görüntülü olabilir. Aksi takdirde, immün belirli sinaptik bölmeleri işaretlemek için yapılabilir. Buna ek olarak, elektrofizyoloji kolayca nörotransmisyon işleyişini değerlendirmek için disseke larvaları olabilir.
Drosophila NMJ temel yapısı ve işlevi aydınlatılan ilk …
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss | 000000-1063-181 | ||
| 3mm Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools Inc. | 15000-0 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | Long forceps | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | Short forceps | |
| SylGard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning Corp. | 3097358-1004 | Used to make dissection plates | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich Inc. | 252549-25ML | ||
| Stainless Steel Minutien Pins -0.1 MM Diameter | Fine Science Tools Inc. | 26002-10 |
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila. Cell. , 73-1137 (1993).
- Feng, . A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).
