Дрозофилы личинок NMJ Immunohistochemistry
Summary
Этот протокол свидетельствует о том, как выполнить иммуногистохимии на расчлененный личинки дрозофилы.
Abstract
<em> Drosophila</em> Нервно-мышечном соединении (NMJ) является создана модель системы, используемой для исследования синаптических развития и пластичности. Широкое использование<em> Drosophila</em> Двигательного аппарата связано с его высокой доступности. Это могут быть проанализированы с одноклеточных разрешения. Есть 30 мышцы в hemisegment которого механизмом в рамках периферийной стенке тела известны. В общей сложности 31 моторных нейронов придают эти мышцы в шаблон, который имеет высокую точность. Использование молекулярной биологии и генетики, можно создать трансгенных животных или мутанты. Затем, можно изучать последствия развития на морфологию и функцию NMJ. Immunohistochemistry может использоваться для четко изображение компонентов NMJ. В этой статье мы покажем, как использовать антитела окрашивания для визуализации<em> Drosophila</em> Личиночной NMJ.
Protocol
Discussion
Иммуногистохимии (IHC) имеет жизненно важное значение для изучения NMJ биологии, поскольку она позволяет визуализировать NMJ. Это достигается с помощью антител, которые распознают нейронной мембраны (например, HRP), presynapse (например, CSP, SYT), и / или postsynapse (например, DLG). Сигнальных молекул, структ?…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 000000-1063-181 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | ||
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | ||
| Adams™ Nutator Mixer | Becton, Dickinson and Company | 421105 | ||
| No.1 Precision knife | X-Acto | 3201 | ||
| No. 16 Blades | X-Acto | 216 | ||
| ProLong Gold Antifade reagent | Invitrogen Corporation | 36930 |
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Collins, C. A., DiAntonio, A. Synaptic development: insights from Drosophila. Curr Opin Neurobiol. 17 (1), 35-42 (2007).
