الموقع محلية الصنع تطفير موجه من البلازميدات الجامعة
Summary
موقع الطفرات الموجهة من البلازميدات كله هو وسيلة بسيطة لخلق أشكال مختلفة قليلا من البلازميد الأصلي. هنا علينا أن نظهر وسيلة سهلة وفعالة من حيث التكلفة لتقديم بدائل في قاعدة البلازميد قياسي باستخدام الكواشف.
Abstract
موقع الطفرات الموجهة من البلازميدات كله هو وسيلة بسيطة لخلق أشكال مختلفة قليلا من البلازميد الأصلي. مع هذا الأسلوب يمكن أن تتغير الجينات المستنسخة المستهدفة من قبل الحذف ، أو استبدال لقواعد الإدراج قليلة مباشرة في البلازميد. وهو يعمل عن طريق تضخيم ببساطة البلازميد كله ، في رد فعل غير thermocycling PCR مقرا لها. خلال رد فعل تتكامل الاشعال مطفرة ، تحمل الطفرة المرجوة ، في البلازميد توليفها حديثا. في هذا الفيديو التعليمي نظهر وسيلة سهلة وفعالة من حيث التكلفة لتقديم بدائل في قاعدة البلازميد. بروتوكول يعمل مع الكواشف القياسية ومستقلة عن مجموعات التجارية ، التي غالبا ما تكون مكلفة للغاية. ويمكن تطبيق هذا البروتوكول الحد من التكلفة الإجمالية للتفاعل إلى الثامنة وما يكلف به بعض مجموعات تجارية. نحن في هذا الفيديو التعليق أيضا على الخطوات الحاسمة خلال العملية ، ويعطي تعليمات مفصلة حول كيفية تصميم الاشعال مطفرة.
Protocol
Discussion
موقع الطفرات الموجهة هي أسلوب الطفرات ، التي توفر طريقة سريعة لتحور الجين يحملها البلازميد. ويمكن أن يتم رد الفعل كله في يوم واحد فقط. مع هذا الأسلوب ، فإنه سيكون في حاجة فقط زوج من الاشعال مجانية تحمل طفرات المطلوب وتصحيح التجارب المطبعية بوليميريز مثل Pfu – البلمرة. و?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pfu polymerase (recombinant or native) | fermentas | EP0571 or EP0501 | ||
| dNTP mix 10 mM | fermentas | R0191 | ||
| DpnI or DpnI Fast digest | fermentas | ER1701 | ||
| primers | invitrogen | desalted |
Riferimenti
- Papworth, C., Bauer, J. C., Braman, J., Wright, D. A. QuikChange site-directed mutagenesis. Strategies. 9, 3-4 (1996).
