Mutagenesis האתר ביתי בימוי של פלסמידים שלמים
Summary
Mutagenesis האתר בבימויו של פלסמידים כולה היא דרך פשוטה ליצור וריאציות שונות במקצת של הפלסמיד המקורי. כאן אנו מדגימים דרך יעילה קל עלות להציג החלפות בסיס לתוך ריאגנטים באמצעות פלסמיד רגיל.
Abstract
Mutagenesis האתר בבימויו של פלסמידים כולה היא דרך פשוטה ליצור וריאציות שונות במקצת של הפלסמיד המקורי. באמצעות שיטה זו הגן היעד משובטים ניתן לשנות על ידי מחיקה החלפה, או החדרה של כמה בסיסים ישירות לתוך פלסמיד. זה עובד פשוט על ידי הגברה פלסמיד שלם, בתגובה PCR מבוססי הלא thermocycling. במהלך התגובה primers מוטגניות, נושאים את המוטציה הרצויה, משולבים פלסמיד מסונתז החדש. זה וידאו של מורה לנו להראות דרך יעילה קל עלות להציג החלפות בסיס לתוך פלסמיד. פרוטוקול עובדת עם חומרים כימיים סטנדרטיים אינה תלויה ערכות מסחריות, אשר לעתים קרובות הן יקרות מאוד. יישום פרוטוקול זה יכול להפחית את העלות הכוללת של כתגובה שמינית ממה שזה עולה באמצעות כמה ערכות מסחריות. בסרטון הזה אנחנו גם להגיב על השלבים הקריטיים בתהליך ולתת הוראות מפורטות כיצד לתכנן את primers מוטגניות.
Protocol
Discussion
Mutagenesis האתר מכוון הוא mutagenesis, שיטה אשר מספק דרך מהירה מוטציות הגן נישא על ידי פלסמיד. תגובה כולו יכול להיעשות ביום אחד בלבד. באמצעות שיטה זו, היא תצטרך רק זוג primers חינם נושאת את המוטציות הרצוי והגהה פולימראז כגון פולימראז-Pfu. הפלסמיד מסונתז החדש ניתן להפריד את הפלסמיד הה…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pfu polymerase (recombinant or native) | fermentas | EP0571 or EP0501 | ||
| dNTP mix 10 mM | fermentas | R0191 | ||
| DpnI or DpnI Fast digest | fermentas | ER1701 | ||
| primers | invitrogen | desalted |
Riferimenti
- Papworth, C., Bauer, J. C., Braman, J., Wright, D. A. QuikChange site-directed mutagenesis. Strategies. 9, 3-4 (1996).
