Questo video mostra una procedura per isolare protoplasti intatti da tessuti di 14-giorno-vecchie piantine di Arabidopsis. Dato che il protoplasti isolati rimangono intatte per almeno 96 ore e sono isolati da piantine invece di piante mature di un mese-vecchia, questa procedura accelera i test che richiedono protoplasti intatti.
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Articolo metodologico
Isolamento di protoplasti da tessuti di 14-giorni di età piantine di Arabidopsis thaliana
In questo articolo
Sommario
Abstract
Protoplasti sono cellule vegetali che hanno avuto le loro pareti cellulari enzimaticamente rimosso. Isolamento di protoplasti dai tessuti vegetali diversi per la prima volta segnalato più di 40 anni fa
Protocollo
Parte 1. Preparazione del terreno solido per le piante in crescita.
Noi di solito le piante sulla cultura concentrato Murasige e Skoog (MS) media integrato con 1% di saccarosio e lo 0,7% agar. Esso contiene tutti gli ingredienti necessari per mantenere le piante sane.
Per preparare 1L di MS, media pH 5,7
- Aggiungere 2,15 g di MS polvere in 800 ml di acqua in bottiglia da 1,5 2.0L autoclavabile.
- Posizionare un bar mescolando nella bottiglia e si dissolvono in polvere MS agitando medio su un piatto mescolando.
- Mescolando, aggiungere, goccia a goccia, KOH 1N per aggi....
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Discussione
Per garantire l'alto rendimento di protoplasti intatti, è molto importante per start-up con piante sane. Utilizzare un filtro-sterilizzare le soluzioni per l'isolamento protoplasti. Ricordate che protoplasti sono fragili. Pertanto, quando si sono movimentazione protoplasti, non si mescolano, o vortice pipettare vigorosamente perché li freni. Invece, mescolare protoplasti lentamente ruotando o con nastro adesivo il tubo di centrifuga. La procedura descritta protoplasti resa intatta che sono vitali per almeno 96 h.......
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Dichiarazioni
Il brevetto provvisorio che descrive la procedura per il suo utilizzo in analisi funzionali di geni della pianta è stato depositato presso la Cornell Center For Enterprise Technology e commercializzazione (CCTEC), giugno 2008. Docket Nessun 50341/015001: Vatamaniuk, OK e Zhai, Metodo Z. per una rapida analisi funzionali di geni della pianta.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dal Experiment Station Cornell University agricolo (CUAES) NYC-125433 Hatch Grant e Cornell Start-Up sovvenzione concessa a OKV
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Miscela di Sali Basali Murashige e Skoog (MS) | Sigma-Aldrich | M5524 | |
| Agar | Sigma-Aldrich | A1296 | |
| Piastre di Petri (100x15 mm) | Krackeler Scientific, Inc. | 82-4001 | |
| Cellulasi (Onozuka R‐10) | Research Products International Corp. | C32200 | |
| Macerozima (R10) | Research Products International Corp. | M22010 | |
| Garze di tela di cotone | Fisher Scientific | 06-665-29 | |
| LabRotator | Fisher Scientific | 1167152Q | |
| Centrifuga Allegra X‐15R | VWR international | 392932 | |
| Microscopio Axioskop 2 Plus | Carl Zeiss, Inc. |
Riferimenti
- Cocking, E. C. A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles. Nature. 187, 962-963 (1960).
- Chen, S., Halkier, B. A. Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus. J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).
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Ristampe e permessi
