14 gün eski Fideler Dokular protoplast izolasyonu Arabidopsis thaliana</em
Summary
Bu video 14 günlük fide Arabidopsis dokuları bozulmadan protoplast izole etmek için bir prosedür gösterir. Izole protoplast en az 96h bozulmadan kalır ve bir aylık olgun bitkilerin yerine fide izole olduğunu göz önüne alındığında, bu yordamı sağlam protoplast gerektiren testleri hızlandırır.
Abstract
Protoplast bitki hücrelerinin hücre duvarlarının enzimatik çıkarmıştı. Farklı bitki dokularında protoplast izolasyonu ilk 40 yıldan fazla bir zaman önce bildirilmiştir<sup> 1</sup> Ve o zamandan beri, hücre içi proteinler lokalizasyonu, sağlam organelleri izolasyonu ve çift iplikli RNA enterferans (RNAi) tarafından hedeflenen gen inaktivasyonu gibi hücresel süreçleri, çeşitli çalışma adapte edilmiştir<sup> 2-5</sup>. Protoplast yalıtım protokollerin çoğu olgun Arabidopsis yaprak dokularında (örneğin 35 gün bitkiler)<sup> 2-4</sup>. Biz 14 gün eski Arabidopsis fide kullanılarak mevcut protokoller değiştirilebilir. Bu yöntemde, bir gram 14 günlük fide 5 10 vermiştir<sup> 6</sup> -10<sup> 7</sup> En az 96 saat bozulmadan kalır protoplast. Fidecilikten protoplast verimi olgun Arabidopsis yaprakları hazırlıkları ile karşılaştırılabilir, ancak 35-36 gün yerine 15 gün içinde, protoplast izolasyonu tamamlandı. Bu olgun bitkiler kullanılır protoplast izole etmek için gerekli olan zaman ve büyüme odası alanı azaltarak sağlar ve sağlam protoplast gerektiren mansap çalışmaları hızlandırır.
Protocol
Discussion
Sağlıklı bitkiler ile sağlam protoplast yüksek verim sağlamak için start-up için çok önemlidir. Protoplast izole etmek için, filtre sterilize çözümleri kullanın. Protoplast kırılgan olduğunu unutmayın. Bu nedenle, protoplast ele pipetlemeyin veya onları fren şiddetle beri girdap onları karıştırmak yok. Bunun yerine, yavaş yavaş dönen veya santrifüj tüpüne taping protoplast karıştırın. En az 96 saat boyunca canlı açıklanan prosedür verim sağlam protoplast Bu nedenle, protoplast hü…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Start-Up Hibe OKV verilen, Cornell Üniversitesi Ziraat Deney İstasyonu (CUAES) NYC-125.433 Hatch Grant ve Cornell tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Murashige and Skoog Basal Salt Mixture (MS) | Sigma | M5524 | ||
| Agar | Sigma | A1296 | ||
| Petri Dishes (100x15mm) | Kreckeler Scientific | 82-4001 | ||
| Cellulase (Onozuka R‐10) | RPI Corp | C32200 | ||
| Macerozyme (R10) | RPI Corp | M22010 | ||
| Cheesecloth wipes | Fisher Scientific | 06-665-29 | ||
| Lab Rotator | Fisher Scientific | 1167152Q | ||
| Allegra X‐15R Centrifuge | VWR | 392932 | ||
| Axioskop2 Plus Microscope | Zeiss |
Riferimenti
- Cocking, E. C. A Method for the Isolation of Plant Protoplasts and Vacuoles. Nature. 187, 962-963 (1960).
- Chen, S., Halkier, B. A. Characterization of glucosinolate uptake by leaf protoplasts of Brassica napus. J Biol Chem. 275, 22955-22960 (2000).
- Robert, S., Zouhar, J., Carter, C., Raikhel, N. Isolation of intact vacuoles from Arabidopsis rosette leaf-derived protoplasts. Nat. Protocols. 2, 259-262 (2007).
- Yoo, S. D., Cho, Y. H., Sheen, J. Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis. Nat Protoc. 2, 1565-1572 (2007).
- Zhai, Z., Sooksa-nguan, T., Vatamaniuk, O. K. Establishing RNAi as a reverse genetic approach for gene functional analysis in protoplasts. Plant Phys. 149, 642-652 (2009).
