Gibberella zeae ascósporas de producción y de recolección de experimentos de microarrays.
Summary
Para estudiar los procesos de desarrollo de ascosporas en Gibberella zeae, un procedimiento para la recolección en condiciones estériles se filmó con el fin de generar el mayor nivel de información para la descripción del protocolo. Esto debería facilitar la reproducibilidad del experimento, un aspecto crucial en el genoma completo del perfil de expresión de las pruebas de cumplimiento.
Abstract
Fusarium graminearum Schwabe (teleomorfo Gibberella zeae) es un patógeno de las plantas que causan enfermedades costra sobre el trigo y la cebada que reduce el rendimiento de los cultivos y la calidad del grano. F. graminearum también causa pudriciones de tallo y mazorca de maíz y es un productor de micotoxinas como los tricotecenos que contaminan el grano y son perjudiciales para los seres humanos y el ganado (Goswami y Kistler, 2004). El hongo produce dos tipos de esporas. Ascosporas, los propágulos derivados de la reproducción sexual, son la principal fuente de infección primaria. Estas esporas son dados de alta de la fuerza peritecios maduros y dispersadas por el viento (Francl et al 1999). Las infecciones secundarias son causadas principalmente por macroconidios que se producen por medios asexuales en la superficie de la planta. Para estudiar los procesos de desarrollo de las ascosporas de este hongo, un procedimiento para su obtención en grandes cantidades bajo condiciones estériles, se requería. El protocolo fue filmado el fin de generar el mayor nivel de información para la comprensión y la reproducibilidad, aspectos cruciales cuando genoma completo del perfil de expresión génica se generan y se interpretan. En particular, la variabilidad de la germinación de las ascosporas y la actividad biológica depende de la previa manipulación del material. El uso del vídeo para documentar cada paso en la producción de ascosporas se propone con el fin de incrementar la estandarización, cumpliendo con los requisitos cada vez más estrictas para el análisis de microarrays. El procedimiento sólo requiere equipo de laboratorio estándar. Pasos se muestran para evitar la contaminación y la sincronización de tiempo a favor de las ascosporas.
Protocol
Discussion
El protocolo que aquí se presenta se basa en los procedimientos previos para la producción perithecial de Fusarium spp. (Klittich y Leslie, 1988; Trail y Common, 2000). Normalización del procedimiento por el cual grandes cantidades de ascosporas (suficientes para el análisis de microarrays) se han generado era esencial para la reproducibilidad del experimento. Se ha informado de que las diferencias de los factores ambientales, la edad y el sustrato puede cambiar el carácter biológico de ascosporas (Beyer y Verreet, 2005). Por lo tanto…
Acknowledgements
Los autores agradecen a Karen Hilburn para el apoyo técnico excelente. Este proyecto fue financiado por la Iniciativa Nacional de Investigación del USDA Servicio Cooperativo Estatal de Investigación, Educación y Extensión (Premio # 2004-35604-14327). Matías Pasquali es apoyado por Branco Weiss Comunidad. El trigo de los EE.UU. y la Iniciativa de la sarna La cebada es también reconocido por el continuo apoyo de la investigación.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Petri dish 9 cm Diameter | Tool | |||
| Tween 60 (20%) | Reagent | |||
| Carrot agar (20% w/v organic carrots and 1.5% w/v agar) | Reagent |
Riferimenti
- Beyer, M., Verreet, J. A., Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J., Goswami, R. S., Kistler, H. C., Klittich, C. J. R., Leslie, J. F., Trail, F., Common, R., Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E., Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors. Genetica. 118, 417-2013 (2005).
