يعيش التصوير للهجرة الخلايا الدبقية في القرص العين تخيلي ذبابة الفاكهة
Summary
نحن هنا وصف بروتوكول لدراسة الهجرة من الخلايا الدبقية في عين ذبابة الفاكهة النامية باستخدام التحليل المجهري مع الخلايا الحية المقترنة GFP الدبقية المفتاحية.
Abstract
يجب أن الخلايا الدبقية كل من الفقاريات واللافقاريات الكائنات على الهجرة الى مناطق الهدف النهائي من أجل ensheath ودعم الخلايا العصبية المرتبطة بها. بينما أحرز التقدم الذي أحرز مؤخرا لوصف الهجرة حية من خلايا الدبقية في الجناح العذراء النامية (1) ، ودراسات<em> ذبابة الفاكهة</emوقد شملت> الهجرة الخلية الدبقية عادة فحص الأنسجة الثابتة. تحليل مجهري للخلايا حية متحركة يوفر القدرة على دراسة السلوك الخلوية في جميع مراحل عملية الهجرة ، بما في ذلك تحديد سعر والتغيرات في اتجاه النمو. يقترن استخدام الأدوات الوراثية ، ويمكن استخدام التصوير العيش لتحديد أدوار أكثر دقة لجينات معينة في عملية التنمية. العمل السابقة Silies<em> وآخرون.</emوقد وصفت> (2) هجرة الدبقية مصدره السويقة البصرية ، وهو الهيكل الذي يربط بين العين والدماغ النامي ، في قرص تخيلي في أنسجة العين الثابتة. نحن هنا الخطوط العريضة لبروتوكول لدراسة الهجرة حية من خلايا الدبقية في<em> ذبابة الفاكهة</em> القرص العين تخيلي. علينا أن نستفيد من خط ذبابة الفاكهة التي تعبر عن GFP في الدبقية النامية لمتابعة تطور الخلايا الدبقية في نوع الحيوانات البرية ومتحولة.
Protocol
Discussion
في هذا البروتوكول وصفنا مراقبة الهجرة الخلايا الدبقية إلى القرص العين تخيلي باستخدام المجهر العيش. في مثالنا اكتب البرية (الشكل 1 م) ، استخدمنا علامة GFP النووية لمراقبة حركة الخلايا الدبقية في القرص العين على مدى ساعة واحدة. في متحولة عن الجينات المطلوبة للمرشح ل…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
معتمد من قبل باتريك كافرتى زمالات ما بعد الدكتوراه من جمعية التصلب المتعدد في كندا.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
Riferimenti
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Genetica. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
