A continuación se describe un protocolo para examinar la migración de las células gliales en el desarrollo del ojo de Drosophila mediante el análisis microscópico directo emparejado con GFP etiquetados células gliales.
Abstract
Las células gliales de vertebrados e invertebrados organismos deben emigrar a las regiones de destino final para ensheath y apoyar las neuronas asociadas. Si bien el progreso reciente ha sido hecho para describir la migración en vivo de las células gliales en el ala en desarrollo pupal (1), los estudios de<em> Drosophila</em> La migración de células gliales que suelen participar el examen de tejido fijado. Análisis en vivo microscópico de las células móviles ofrece la posibilidad de examinar el comportamiento celular en todo el proceso migratorio, incluyendo la determinación de la tasa y los cambios de dirección del crecimiento. Junto con el uso de herramientas genéticas, imágenes en vivo se puede utilizar para determinar las funciones más precisa de genes específicos en el proceso de desarrollo. El trabajo previo de Silies<em> Et al.</em> (2) ha descrito la migración de las células de origen en el tallo óptico, una estructura que conecta el ojo y el cerebro en desarrollo, en el disco imaginal del ojo en el tejido fijado. Aquí planteamos un protocolo para el examen de la migración en vivo de las células gliales en el<em> Drosophila</em> Disco imaginal del ojo. Nos aprovechamos de una línea de Drosophila que expresa GFP en las células de desarrollo para seguir la progresión de las células gliales de tipo salvaje y en los animales mutantes.
Protocol
Parte 1: Pre-montaje experimental. Una semana de antelación, compañero de moscas para generar larvas que expresan GFP bajo el control de un promotor glial-específica. Para nuestro experimento visualizar GFP etiquetados con una secuencia de localización nuclear expresado en las células gliales con la polaridad invertida (repo) promotor (3, 4). Prepare la cubierta se desliza por lo menos un día antes en remojo 18 mm cubreobjetos redondos de 10 minutos en 1% de poli-L-lisina solución y …
Discussion
En este protocolo se describe la observación de la migración de células gliales en el disco imaginal del ojo mediante microscopía en vivo. En nuestro ejemplo, de tipo salvaje (figura 1 AD), se utilizó un marcador GFP nuclear para observar el movimiento de células gliales en el disco de los ojos en el transcurso de una hora. En un mutante de un gen candidato requerido para la migración de células gliales en la actualidad objeto de estudio en nuestro laboratorio, hemos observado un estancamiento de los n?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty es apoyado por una beca postdoctoral de la Sociedad de Esclerosis Múltiple de Canadá.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Poly-L-lysine
Reagent
Sigma
P8920
Schneider’s Insect Media
Reagent
Sigma
S0146
Penicillin-Streptomycin
Reagent
Sigma
P4458
Insulin solution from bovine pancreas
Reagent
Sigma
I0516
Chamlide Magnetic chamber
Tool
Live cell Instrument
CM-R-10
35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip
Ultra fine clipper scissors
Tool
Fine scientific tools
15200-00
Dumont #5 forceps
Tool
Fine scientific tools
11251-20
Fluorescent microscope
Microscope
Zeiss
Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used.
Cafferty, P., Xie, X., Browne, K., Auld, V. J. Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc. J. Vis. Exp. (29), e1155, doi:10.3791/1155 (2009).