قياس سبان الخميرة الحياة الزمني بواسطة خلايا ثمرة المسنين
Summary
الشيخوخة في الخميرة الزمني يشير الى فقدان قابلية الخلايا المرتبطة بها مع مرور الوقت في مرحلة ثابتة. نحن هنا وصف أسلوب الإنتاجية العالية لتحديد كميا مدى الحياة الخميرة زمني.
Abstract
الخميرة في مهدها<em> السكيراء الجعوية</em> وقد ثبت أن كائن نموذجا هاما في مجال البحوث الشيخوخة<sup> 1</sup>. وتنسخي ويمتد زمنيا الحياة هما النماذج المستخدمة لدراسة وضع الشيخوخة في الخميرة. وتعرف الشيخوخة تنسخي حيث بلغ عدد خلايا الخميرة والدة ابنة وحيدة الخلية تنتج قبل الشيخوخة ، ويمكن تعريف الشيخوخة الزمني بواسطة طول الوقت خلايا البقاء في حالة هدوء غير تقسيم شبيهة<sup> 2</sup>. طورنا أسلوب الإنتاجية العالية للقياس الكمي لمدى الحياة زمني. هذا الأسلوب ينطوي شيخوخة الخلايا في المتوسط في إطار تعريف التحريض وعند درجة حرارة ثابتة. في كل نقطة العمر ، تتم إزالة السكان فرعية من الخلايا من الشيخوخة وتحصين الثقافة المتوسطة في النمو الغنية. بعد ذلك يتم الحصول على النمو وارتفاع القرار منحنى لهذه الفئة من السكان دون سن من الخلايا باستخدام آلة Bioscreen MBR C. ثم يتم تطبيق خوارزمية لتحديد الحصة النسبية من خلايا قابلة للحياة في كل من الفئات السكانية الفرعية على أساس حركية النمو في كل نقطة في سن. هذه الطريقة تتطلب وقتا أقل بكثير والموارد بالمقارنة مع غيرها من المقايسات عمر زمني مع الحفاظ على استنساخ والدقة. ينبغي للطبيعة عالية الإنتاجية من هذا الاختبار يسمح للشاشات واسعة النطاق الوراثية والكيميائية لتحديد معدلات طول العمر رواية للمزيد من التجارب في الكائنات الحية أكثر تعقيدا.
Protocol
Discussion
الحياة زمني عالية الإنتاجية مقايسة تمتد الموصوفة هنا هو وسيلة فعالة لقياس القدرة الشيخوخة أعداد كبيرة من السلالات ذات الدقة العالية والدقة. التقدم الرئيسي لهذا الأسلوب أكثر من الطرق التقليدية لتحديد بقاء على قيد الحياة من خلال إحصاء الوحدات المكونة للمستعمرة (انظر…
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح 1R21AG031965 – 01A1. عضو الكنيست هو باحث طبي جديد اليسون مؤسسة في الشيخوخة.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagent | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | Reagent | BD | 288620 | |
| Difco Agar | Reagent | BD | 214530 | |
| Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S. | Reagent | MidSci | J630-500G | |
| Amino Acids | Reagent | Sigma | ||
| Ammonium Sulfate | Reagent | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagent | Fisher | D16-10 | |
| Bioscreen C MBR machine | Tool | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Bioscreen 100-well Honeycomb plate | Tool | Growth Curves USA | 9502550 |
Riferimenti
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109 (2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D. The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae. Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).
- Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast. Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).
- Fabrizio, P., et al. Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).
