Quantifier Life Span levure chronologique par excroissance de cellules âgées

Summary

Vieillissement chronologique dans la levure se réfère à la perte de la viabilité cellulaire associée avec le temps dans la phase stationnaire. Nous décrivons ici une méthode à haut débit pour déterminer quantitativement la durée de vie de la levure chronologique.

Abstract

La levure bourgeonnante<em> Saccharomyces cerevisiae</em> S'est avérée être un organisme modèle important dans le domaine de la recherche sur le vieillissement¹. La durée de vie réplicative et chronologique, sont deux paradigmes établis utilisés pour étudier le vieillissement chez la levure. Le vieillissement réplicative est définie comme le nombre de cellules filles une cellule de levure unique mère produit avant la sénescence, le vieillissement chronologique est définie par la longueur des cellules de temps peut survivre dans un non-séparation, la quiescence-état². Nous avons développé une méthode à haut débit pour la mesure quantitative de la durée de vie chronologique. Cette méthode implique le vieillissement des cellules dans un milieu défini sous agitation et à température constante. À chaque âge-point, une sous-population de cellules est retiré de la culture du vieillissement et inoculé dans un milieu de croissance riche. Une courbe de croissance à haute résolution est alors obtenue pour cette sous-population de cellules âgées utilisant un Bioscreen C MBR machine. Un algorithme est ensuite appliqué pour déterminer la proportion relative de cellules viables dans chaque sous-population basée sur la cinétique de croissance à chaque âge-point. Cette méthode exige beaucoup moins de temps et de ressources par rapport aux autres tests chronologiques durée de vie tout en préservant la reproductibilité et la précision. La nature à haut débit de ce test devrait permettre de grands écrans génétiques et chimiques pour identifier les modificateurs de longévité roman pour des tests supplémentaires dans les organismes plus complexes.

Protocol

Partie 1: Préparation des cultures de vieillissement Streak souches d'intérêt des stocks congelés sur des plaques de gélose YEPD (extrait de levure 1%, 2% de bacto-peptone, 2% d'agar, 2% de glucose). Incuber les cellules à 30 ˚ C pendant 48 heures ou jusqu'à ce que des colonies isolées apparaissent. Prélever des colonies unique et inoculer dans 5 ml de milieu liquide YEPD (extrait de levure 1%, 2% de bacto-peptone, 2% de glucose) dans des tubes à essai. Cul…

Discussion

Le test à haut débit chronologique la durée de vie décrit ici est une méthode efficace pour quantifier le potentiel de vieillissement d'un grand nombre de souches avec une grande précision et de précision. L'avance principal de cette méthode par rapport aux méthodes classiques pour déterminer la survie en comptant unités formant colonie (voir par exemple ³⁾ est l'utilisation d'un dispositif de lecture secoueur / incubateur / plaque telles que la machine Bioscreen C MBR afin d'ob…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Bacto Peptone	Reagent	BD	211677
Bacto Yeast Extract	Reagent	BD	288620
Difco Agar	Reagent	BD	214530
Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S.	Reagent	MidSci	J630-500G
Amino Acids	Reagent	Sigma
Ammonium Sulfate	Reagent	Spectrum	AM185
Dextrose	Reagent	Fisher	D16-10
Bioscreen C MBR machine	Tool	Growth Curves USA	5101370
Bioscreen 100-well Honeycomb plate	Tool	Growth Curves USA	9502550